西南国防医药
西南國防醫藥
서남국방의약
MEDICAL JOURNAL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN SOUTHWEST CHINA
2014年
3期
233-236
,共4页
邹利全%曹亚玲%黄茂涛%宋航%黄一%李学成%游斌%陈陵
鄒利全%曹亞玲%黃茂濤%宋航%黃一%李學成%遊斌%陳陵
추리전%조아령%황무도%송항%황일%리학성%유빈%진릉
人端粒酶逆转录酶%启动子%人5型腺病毒%白介素-24
人耑粒酶逆轉錄酶%啟動子%人5型腺病毒%白介素-24
인단립매역전록매%계동자%인5형선병독%백개소-24
目的 包装并鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子特异驱动白介素-24(IL-24)的重组复制缺陷型腺病毒.方法 全基因合成优化后的hTERT启动子,插入质粒pGL3-basic的多克隆位点(pGL3-phTERT);从人外周血单核细胞扩增IL-24,插入pGL3-phTERT质粒的hTERT启动子下游获得pGL3-phTERT-IL24;随后将phTERT-IL24插入pShuttle中间质粒,使用AdEasyTM Adenoviral Vector System包装Ad-phTERT-IL24重组腺病毒;同时包装CMV启动子驱动IL-24的腺病毒载体为阴性对照(Ad-CMV-IL24),以空载腺病毒Ad作为空白对照.用20 MOI重组腺病毒感染SGC-7901、MKN-45、HF细胞,采用PCR及Western blot检测IL-24在RNA及蛋白水平的表达.结果 成功包装Ad-hTERT-IL24重组腺病毒.感染Ad-hTERT-IL24后,hTERT阳性肿瘤细胞内IL-24表达显著上调,但hTERT阴性的HF细胞则无IL-24表达;感染阴性对照Ad-CMV-IL24后,hTERT阳性或阴性细胞内均有IL-24表达,感染空白对照Ad后,hTERT阳性或阴性细胞内均无IL-24表达.结论 Ad-hTERT-IL24腺病毒载体可有效介导IL-24特异表达于hTERT阳性肿瘤细胞内.
目的 包裝併鑒定人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)啟動子特異驅動白介素-24(IL-24)的重組複製缺陷型腺病毒.方法 全基因閤成優化後的hTERT啟動子,插入質粒pGL3-basic的多剋隆位點(pGL3-phTERT);從人外週血單覈細胞擴增IL-24,插入pGL3-phTERT質粒的hTERT啟動子下遊穫得pGL3-phTERT-IL24;隨後將phTERT-IL24插入pShuttle中間質粒,使用AdEasyTM Adenoviral Vector System包裝Ad-phTERT-IL24重組腺病毒;同時包裝CMV啟動子驅動IL-24的腺病毒載體為陰性對照(Ad-CMV-IL24),以空載腺病毒Ad作為空白對照.用20 MOI重組腺病毒感染SGC-7901、MKN-45、HF細胞,採用PCR及Western blot檢測IL-24在RNA及蛋白水平的錶達.結果 成功包裝Ad-hTERT-IL24重組腺病毒.感染Ad-hTERT-IL24後,hTERT暘性腫瘤細胞內IL-24錶達顯著上調,但hTERT陰性的HF細胞則無IL-24錶達;感染陰性對照Ad-CMV-IL24後,hTERT暘性或陰性細胞內均有IL-24錶達,感染空白對照Ad後,hTERT暘性或陰性細胞內均無IL-24錶達.結論 Ad-hTERT-IL24腺病毒載體可有效介導IL-24特異錶達于hTERT暘性腫瘤細胞內.
목적 포장병감정인단립매역전록매(hTERT)계동자특이구동백개소-24(IL-24)적중조복제결함형선병독.방법 전기인합성우화후적hTERT계동자,삽입질립pGL3-basic적다극륭위점(pGL3-phTERT);종인외주혈단핵세포확증IL-24,삽입pGL3-phTERT질립적hTERT계동자하유획득pGL3-phTERT-IL24;수후장phTERT-IL24삽입pShuttle중간질립,사용AdEasyTM Adenoviral Vector System포장Ad-phTERT-IL24중조선병독;동시포장CMV계동자구동IL-24적선병독재체위음성대조(Ad-CMV-IL24),이공재선병독Ad작위공백대조.용20 MOI중조선병독감염SGC-7901、MKN-45、HF세포,채용PCR급Western blot검측IL-24재RNA급단백수평적표체.결과 성공포장Ad-hTERT-IL24중조선병독.감염Ad-hTERT-IL24후,hTERT양성종류세포내IL-24표체현저상조,단hTERT음성적HF세포칙무IL-24표체;감염음성대조Ad-CMV-IL24후,hTERT양성혹음성세포내균유IL-24표체,감염공백대조Ad후,hTERT양성혹음성세포내균무IL-24표체.결론 Ad-hTERT-IL24선병독재체가유효개도IL-24특이표체우hTERT양성종류세포내.
