中华危重病急救医学
中華危重病急救醫學
중화위중병급구의학
Chinese Critical Care Medicine
2014年
2期
110-114
,共5页
刘海霞%陈淼%杨秀娟%戢慧%陈涛%陈华军
劉海霞%陳淼%楊秀娟%戢慧%陳濤%陳華軍
류해하%진묘%양수연%집혜%진도%진화군
血红素加氧酶-1%凋亡%肺泡上皮细胞%Ⅱ型%过氧化氢%大鼠
血紅素加氧酶-1%凋亡%肺泡上皮細胞%Ⅱ型%過氧化氫%大鼠
혈홍소가양매-1%조망%폐포상피세포%Ⅱ형%과양화경%대서
Heme oxygenase-1%Apoptosis%Alveolar epithelial cell%type Ⅱ%Hydrogen peroxide%Rat
目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对过氧化氢(H2O2)刺激后原代培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)凋亡率、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)及细胞色素C(Cyt-C)表达的影响.方法 原代培养雄性SD大鼠AECⅡ细胞,被随机分为4组:对照组(A组)加入生理盐水;H2O2损伤组(B组)加入0.5 mmol/L H2O2处理;HO-1预处理组(C组)给予0.2 μmol/L HO-1预处理2h后加入0.5 mmol/L H2O2;HO-1抑制组(D组)给予10 μmol/L锌原卟啉Ⅸ(ZnppⅨ)预处理2h后加入0.5 mmol/L H2O2,各组细胞处理后继续培养.于药物干预后2、6、12h采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测活化caspase-3、Cyt-C蛋白表达.结果 各组细胞凋亡率均随H2O2作用时间延长而逐渐升高;B组干预后各时间点AECⅡ凋亡率均较A组显著增加;C组AECⅡ凋亡率则较B组明显降低[2 h:(11.46±1.47)％比(20.83±1.55)％,6 h:(12.30±1.37)％比(27.14±1.53)％,12 h:(12.62±1.39)％比(35.66±0.74)％,均P＜0.05];D组2、6、12 h AECⅡ凋亡率[(24.33±1.36)％、(31.67±1.24)％、(36.93±2.40)％]与B组比较则差异无统计学意义.各组活化caspase-3、Cvt-C蛋白表达量均随H2O2作用时间延长而逐渐增加;B组各时间点活化caspase-3、Cyt-C蛋白表达量均较A组明显增加;C组活化caspase-3蛋白表达量(灰度值)较B组明显减少(2 h:0.250±0.039比0.650±0.072,6 h:0.470±0.080比0.960±0.118,12 h:0.680±0.099比1.830±0.220,均P＜0.05);Cyt-C蛋白表达量(灰度值)也较B组明显减少(2 h:0.250±0.074比0.390±0.069,6 h:0.340±0.043比0.670±0.120,12 h:0.470±0.072比1.360±0.112,均P＜0.05);D组活化caspase-3蛋白表达量(0.720±0.052、1.060±0.109、1.880±0.159)、Cyt-C蛋白表达量(0.500±0.110、0.860±0.050、1.480±0.140)与B组比较差异无统计学意义.结论 HO-1预处理可降低不同时间(2～ 12 h)H2O2损伤的AECⅡ凋亡率,并减少活化caspase-3及Cyt-C的表达,表明HO-1对损伤的AECⅡ保护过程可能有线粒体凋亡通路的参与.
目的 探討血紅素加氧酶-1(HO-1)對過氧化氫(H2O2)刺激後原代培養大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞(AECⅡ)凋亡率、活化天鼕氨痠特異性半胱氨痠蛋白酶3(caspase-3)及細胞色素C(Cyt-C)錶達的影響.方法 原代培養雄性SD大鼠AECⅡ細胞,被隨機分為4組:對照組(A組)加入生理鹽水;H2O2損傷組(B組)加入0.5 mmol/L H2O2處理;HO-1預處理組(C組)給予0.2 μmol/L HO-1預處理2h後加入0.5 mmol/L H2O2;HO-1抑製組(D組)給予10 μmol/L鋅原卟啉Ⅸ(ZnppⅨ)預處理2h後加入0.5 mmol/L H2O2,各組細胞處理後繼續培養.于藥物榦預後2、6、12h採用流式細胞儀檢測細胞凋亡率,用蛋白質免疫印跡試驗(Western Blot)檢測活化caspase-3、Cyt-C蛋白錶達.結果 各組細胞凋亡率均隨H2O2作用時間延長而逐漸升高;B組榦預後各時間點AECⅡ凋亡率均較A組顯著增加;C組AECⅡ凋亡率則較B組明顯降低[2 h:(11.46±1.47)％比(20.83±1.55)％,6 h:(12.30±1.37)％比(27.14±1.53)％,12 h:(12.62±1.39)％比(35.66±0.74)％,均P＜0.05];D組2、6、12 h AECⅡ凋亡率[(24.33±1.36)％、(31.67±1.24)％、(36.93±2.40)％]與B組比較則差異無統計學意義.各組活化caspase-3、Cvt-C蛋白錶達量均隨H2O2作用時間延長而逐漸增加;B組各時間點活化caspase-3、Cyt-C蛋白錶達量均較A組明顯增加;C組活化caspase-3蛋白錶達量(灰度值)較B組明顯減少(2 h:0.250±0.039比0.650±0.072,6 h:0.470±0.080比0.960±0.118,12 h:0.680±0.099比1.830±0.220,均P＜0.05);Cyt-C蛋白錶達量(灰度值)也較B組明顯減少(2 h:0.250±0.074比0.390±0.069,6 h:0.340±0.043比0.670±0.120,12 h:0.470±0.072比1.360±0.112,均P＜0.05);D組活化caspase-3蛋白錶達量(0.720±0.052、1.060±0.109、1.880±0.159)、Cyt-C蛋白錶達量(0.500±0.110、0.860±0.050、1.480±0.140)與B組比較差異無統計學意義.結論 HO-1預處理可降低不同時間(2～ 12 h)H2O2損傷的AECⅡ凋亡率,併減少活化caspase-3及Cyt-C的錶達,錶明HO-1對損傷的AECⅡ保護過程可能有線粒體凋亡通路的參與.
목적 탐토혈홍소가양매-1(HO-1)대과양화경(H2O2)자격후원대배양대서Ⅱ형폐포상피세포(AECⅡ)조망솔、활화천동안산특이성반광안산단백매3(caspase-3)급세포색소C(Cyt-C)표체적영향.방법 원대배양웅성SD대서AECⅡ세포,피수궤분위4조:대조조(A조)가입생리염수;H2O2손상조(B조)가입0.5 mmol/L H2O2처리;HO-1예처리조(C조)급여0.2 μmol/L HO-1예처리2h후가입0.5 mmol/L H2O2;HO-1억제조(D조)급여10 μmol/L자원계람Ⅸ(ZnppⅨ)예처리2h후가입0.5 mmol/L H2O2,각조세포처리후계속배양.우약물간예후2、6、12h채용류식세포의검측세포조망솔,용단백질면역인적시험(Western Blot)검측활화caspase-3、Cyt-C단백표체.결과 각조세포조망솔균수H2O2작용시간연장이축점승고;B조간예후각시간점AECⅡ조망솔균교A조현저증가;C조AECⅡ조망솔칙교B조명현강저[2 h:(11.46±1.47)％비(20.83±1.55)％,6 h:(12.30±1.37)％비(27.14±1.53)％,12 h:(12.62±1.39)％비(35.66±0.74)％,균P＜0.05];D조2、6、12 h AECⅡ조망솔[(24.33±1.36)％、(31.67±1.24)％、(36.93±2.40)％]여B조비교칙차이무통계학의의.각조활화caspase-3、Cvt-C단백표체량균수H2O2작용시간연장이축점증가;B조각시간점활화caspase-3、Cyt-C단백표체량균교A조명현증가;C조활화caspase-3단백표체량(회도치)교B조명현감소(2 h:0.250±0.039비0.650±0.072,6 h:0.470±0.080비0.960±0.118,12 h:0.680±0.099비1.830±0.220,균P＜0.05);Cyt-C단백표체량(회도치)야교B조명현감소(2 h:0.250±0.074비0.390±0.069,6 h:0.340±0.043비0.670±0.120,12 h:0.470±0.072비1.360±0.112,균P＜0.05);D조활화caspase-3단백표체량(0.720±0.052、1.060±0.109、1.880±0.159)、Cyt-C단백표체량(0.500±0.110、0.860±0.050、1.480±0.140)여B조비교차이무통계학의의.결론 HO-1예처리가강저불동시간(2～ 12 h)H2O2손상적AECⅡ조망솔,병감소활화caspase-3급Cyt-C적표체,표명HO-1대손상적AECⅡ보호과정가능유선립체조망통로적삼여.
