华中科技大学学报(医学版)
華中科技大學學報(醫學版)
화중과기대학학보(의학판)
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2014年
1期
23-27
,共5页
王君%何生松%刘亚男%张盼%姚景宏
王君%何生鬆%劉亞男%張盼%姚景宏
왕군%하생송%류아남%장반%요경굉
HBx蛋白%Orai1蛋白%通透性钙池调节离子通道%肝癌
HBx蛋白%Orai1蛋白%通透性鈣池調節離子通道%肝癌
HBx단백%Orai1단백%통투성개지조절리자통도%간암
目的 研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)调节细胞内钙离子可能的分子机制,揭示乙型肝炎病毒(HBV)诱导肝癌的可能途径.方法 培养人胚肾细胞(HEK293),取第2代HEK293细胞共转染HBx基因、钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)基因或者间质相互作用因子1(STIM1)基因,免疫共沉淀(co-IP)实验观察细胞内蛋白结合情况,并使用谷胱甘肽巯基转移酶(GST)pull-down实验研究HBx与Orai1作用位点,使用钙离子测量/成像系统检测HBx蛋白对细胞内钙离子的影响.结果 转染后细胞生长状态良好,co-IP实验结果显示HBx蛋白在细胞内可以与Orai1蛋白结合,GST pull-down实验显示HBx蛋白可以与Orai1蛋白C末端结合,钙离子测量/成像系统检测显示HBx蛋白可升高活细胞钙内流.结论 HBx蛋白通过与细胞膜钙离子通道Oria1结合蛋白的C末端结合,增加细胞钙内流,扰乱细胞内钙离子平衡,从而影响细胞增殖等活性.
目的 研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)調節細胞內鈣離子可能的分子機製,揭示乙型肝炎病毒(HBV)誘導肝癌的可能途徑.方法 培養人胚腎細胞(HEK293),取第2代HEK293細胞共轉染HBx基因、鈣釋放激活鈣通道蛋白1(Orai1)基因或者間質相互作用因子1(STIM1)基因,免疫共沉澱(co-IP)實驗觀察細胞內蛋白結閤情況,併使用穀胱甘肽巰基轉移酶(GST)pull-down實驗研究HBx與Orai1作用位點,使用鈣離子測量/成像繫統檢測HBx蛋白對細胞內鈣離子的影響.結果 轉染後細胞生長狀態良好,co-IP實驗結果顯示HBx蛋白在細胞內可以與Orai1蛋白結閤,GST pull-down實驗顯示HBx蛋白可以與Orai1蛋白C末耑結閤,鈣離子測量/成像繫統檢測顯示HBx蛋白可升高活細胞鈣內流.結論 HBx蛋白通過與細胞膜鈣離子通道Oria1結閤蛋白的C末耑結閤,增加細胞鈣內流,擾亂細胞內鈣離子平衡,從而影響細胞增殖等活性.
목적 연구을형간염병독X단백(HBx)조절세포내개리자가능적분자궤제,게시을형간염병독(HBV)유도간암적가능도경.방법 배양인배신세포(HEK293),취제2대HEK293세포공전염HBx기인、개석방격활개통도단백1(Orai1)기인혹자간질상호작용인자1(STIM1)기인,면역공침정(co-IP)실험관찰세포내단백결합정황,병사용곡광감태구기전이매(GST)pull-down실험연구HBx여Orai1작용위점,사용개리자측량/성상계통검측HBx단백대세포내개리자적영향.결과 전염후세포생장상태량호,co-IP실험결과현시HBx단백재세포내가이여Orai1단백결합,GST pull-down실험현시HBx단백가이여Orai1단백C말단결합,개리자측량/성상계통검측현시HBx단백가승고활세포개내류.결론 HBx단백통과여세포막개리자통도Oria1결합단백적C말단결합,증가세포개내류,우란세포내개리자평형,종이영향세포증식등활성.