华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2014年
1期
1-5
,共5页
刘星星%范恒%唐庆%寿折星%左冬梅
劉星星%範恆%唐慶%壽摺星%左鼕梅
류성성%범항%당경%수절성%좌동매
趋化因子受体4%慢病毒%载体构建%过表达
趨化因子受體4%慢病毒%載體構建%過錶達
추화인자수체4%만병독%재체구건%과표체
目的 探讨构建大鼠趋化因子受体4(CXCR4)基因过表达慢病毒载体的技术方法并检测其体外表达目的 基因的水平.方法 设计CXCR4基因引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增CXCR4 基因片段;用Age Ⅰ酶切GV208载体;通过连接酶将CXCR4 基因片段连接至线性化的GV208载体上;运用PCR方法鉴定阳性克隆的CXCR4-GV208载体;按GV208慢病毒包装试剂盒说明书包装慢病毒并运用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法行滴度检测;然后用重组慢病毒转染293T细胞(人胚肾细胞),观察GFP表达.结果 通过PCR成功地扩增了CXCR4基因片段并连接到了GV208病毒载体上,通过PCR及DNA测序鉴定,证明CXCR4-GV208质粒构建正确,重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光及蛋白表达.包装过表达慢病毒并测其浓缩滴度为2.0×108 TU/mL.结论成功构建CXCR4-GV208慢病毒载体,为CXCR4基因的后期研究提供了实验基础.
目的 探討構建大鼠趨化因子受體4(CXCR4)基因過錶達慢病毒載體的技術方法併檢測其體外錶達目的 基因的水平.方法 設計CXCR4基因引物,採用聚閤酶鏈反應(PCR)擴增CXCR4 基因片段;用Age Ⅰ酶切GV208載體;通過連接酶將CXCR4 基因片段連接至線性化的GV208載體上;運用PCR方法鑒定暘性剋隆的CXCR4-GV208載體;按GV208慢病毒包裝試劑盒說明書包裝慢病毒併運用實時定量聚閤酶鏈反應(RT-qPCR)法行滴度檢測;然後用重組慢病毒轉染293T細胞(人胚腎細胞),觀察GFP錶達.結果 通過PCR成功地擴增瞭CXCR4基因片段併連接到瞭GV208病毒載體上,通過PCR及DNA測序鑒定,證明CXCR4-GV208質粒構建正確,重組慢病毒轉染293T細胞後可觀察到熒光及蛋白錶達.包裝過錶達慢病毒併測其濃縮滴度為2.0×108 TU/mL.結論成功構建CXCR4-GV208慢病毒載體,為CXCR4基因的後期研究提供瞭實驗基礎.
목적 탐토구건대서추화인자수체4(CXCR4)기인과표체만병독재체적기술방법병검측기체외표체목적 기인적수평.방법 설계CXCR4기인인물,채용취합매련반응(PCR)확증CXCR4 기인편단;용Age Ⅰ매절GV208재체;통과련접매장CXCR4 기인편단련접지선성화적GV208재체상;운용PCR방법감정양성극륭적CXCR4-GV208재체;안GV208만병독포장시제합설명서포장만병독병운용실시정량취합매련반응(RT-qPCR)법행적도검측;연후용중조만병독전염293T세포(인배신세포),관찰GFP표체.결과 통과PCR성공지확증료CXCR4기인편단병련접도료GV208병독재체상,통과PCR급DNA측서감정,증명CXCR4-GV208질립구건정학,중조만병독전염293T세포후가관찰도형광급단백표체.포장과표체만병독병측기농축적도위2.0×108 TU/mL.결론성공구건CXCR4-GV208만병독재체,위CXCR4기인적후기연구제공료실험기출.
