双碱基延伸法结合荧光偏振法快速检测新甲型H1N1耐药位点方法的建立
쌍감기연신법결합형광편진법쾌속검측신갑형H1N1내약위점방법적건립
Detection of oseltamivir-resistant pandemic influenza A/H1N1 2009 viruses using two-base extension termination and fluorescence polarization methods
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2014年 2期 175-179 ,共5页

    房师松%柴燕文%王昕%吕星%吴春利%程小雯%张仁利%薛红%程锦泉

    방사송%시연문%왕흔%려성%오춘리%정소문%장인리%설홍%정금천

    新甲型H1N1病毒%NA基因%SNP%双碱基延伸%荧光偏振%耐药 新甲型H1N1病毒%NA基因%SNP%雙堿基延伸%熒光偏振%耐藥
    신갑형H1N1병독%NA기인%SNP%쌍감기연신%형광편진%내약
    目的 建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术(Fluorescence polarization,FP)快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法.方法 从GenBank随机下载30条甲型H1N1的NA(neuraminidase)基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT-PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型H1N1流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性.结果 50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生H Y的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100%.结论 本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测.
    목적 건립일충이용쌍감기연신법여형광편진기술(Fluorescence polarization,FP)쾌속검측갑형H1N1류감병독NA기인내약돌변위점적신방법.방법 종GenBank수궤하재30조갑형H1N1적NA(neuraminidase)기인서렬,통과MEGA분석,이용Primer Premier연건설계3조특이인물,기중일대인물통과RT-PCR용우확증함유내약위점H275Y적NA기인,제3조인물시응용쌍감기연신종지법여형광편진기술검측NA기인대체비류약물내약위점H275Y적돌변정황,재수궤선취50주갑형H1N1류감병독진행검측,여측서결과진행비대,험증검측결과적준학성.결과 50주갑형H1N1류감병독적NA단백제275위안기산균위조안산,미발생H Y적체환,재령민도여특이성방면,여전통적기인측서결과일치성균체100%.결론 본방법조작간편、민감성급특이성고、판독결과직관명학、검측비용저,능실현대내약위점돌변적쾌속、준학검측,가응용우여SNP상관질병적쾌속분형화돌변위점적실시감측화림상검측.
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