CAJ | 학술논문

目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法.方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),进行了FQ-PCR检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PCMV 感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对;对FQ-PCR检测结果为PCMV 阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测.结果成功建立了PCMV 的FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1 拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/PCMV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对6个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/PCMV重组质粒分别重复扩增6次,重复结果良好;对15份临床疑似PCMV感染的组织病料进行应用检测表明,其中有9份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%.猪的内脏器管中PCMV含量最高为扁桃体,最低的为小肠.结论成功建立了PCMV FQ-PCR方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊和隐性感染猪的早期检测,对PCMV的快速诊断、综合防控及净化等具有重要意义.
목적 건립일충특이、령민、쾌속검측저거세포병독적TaqMan형광정량PCR방법.방법 근거GenBank이등록적저거세포병독(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA서렬설계합성특이성인물대화TaqMan형광탐침,경우화반응조건,건립료저거세포병독적TaqMan형광정량PCR검측방법(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),진행료FQ-PCR검측방법적민감성、특이성화중복성시험;대의사PCMV 감염림상양품진행료응용검측,병여상규PCR방법진행료비대;대FQ-PCR검측결과위PCMV 양성저적불동내장기관진행병독함량비교검측.결과 성공건립료PCMV 적FQ-PCR방법,표준곡선적순배역치(Ct치)여모판농도유량호적선성관계,상관계수위0.998;검측령민도가체1 고패/μL,시상규PCR적100배;특이성고,대pGEM-T/PCMV중조질립확증정현양성반응곡선,이대6개대조병원적확증곡선균정현음성반응;대불동농도적pGEM-T/PCMV중조질립분별중복확증6차,중복결과량호;대15빈림상의사PCMV감염적조직병료진행응용검측표명,기중유9빈양품위양성,여상규PCR방법검측적양성부합솔위100%.저적내장기관중PCMV함량최고위편도체,최저적위소장.결론 성공건립료PCMV FQ-PCR방법,가용우림상상PCMV감염저적학진화은성감염저적조기검측,대PCMV적쾌속진단、종합방공급정화등구유중요의의.