中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2014年
2期
130-134,174
,共6页
万婷%孟闯%徐正中%单法%解晓莉%殷月兰%陈祥%焦新安
萬婷%孟闖%徐正中%單法%解曉莉%慇月蘭%陳祥%焦新安
만정%맹틈%서정중%단법%해효리%은월란%진상%초신안
结核分枝杆菌%CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白%原核表达%细胞免疫
結覈分枝桿菌%CFP10-ESAT6-TB7.7融閤蛋白%原覈錶達%細胞免疫
결핵분지간균%CFP10-ESAT6-TB7.7융합단백%원핵표체%세포면역
Mycobacterium tuberculosis%CFP10-ESAT6-TB7.7%prokaryotic expression%cellular immunoproperties
目的 构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白的表达质粒,利用大肠杆菌表达系统获得原核蛋白,在小鼠模型上评价其细胞免疫学特性.方法 通过PCR扩增出lhp-linker-esat6-linker和linker-Rv2654c片段,构建正确的pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原核表达质粒,转化BL21(DE3)后在IPTG诱导下表达,并纯化该融合蛋白,western blot验证蛋白的免疫原性,通过T细胞增殖实验和夹心ELISA评价其细胞免疫学特性.结果 成功构建pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原核表达质粒,SDS-PAGE显示在45 kDa处出现目的 条带,Western blot证明融合蛋白对anti-ESAT6,anti-CFP10,anti-His单抗和rGST-TB7.7多抗血清均有反应,说明该融合蛋白具有良好的免疫反应性,T淋巴细胞增殖实验显示该蛋白能明显引起小鼠的T细胞免疫反应.夹心ELISA实验也表明,融合蛋白刺激产生的IFN-γ和IL-4水平与对照组相比均有显著性差异,同时融合蛋白诱导产生的IFN-γ水平明显高于IL-4.结论 CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白在大肠杆菌系统中实现可溶性表达,并获得免疫反应性良好的纯化产物,该融合蛋白能引起明显的T细胞增殖,具有诱导Th1型免疫应答的特性.
目的 構建結覈分枝桿菌CFP10-ESAT6-TB7.7融閤蛋白的錶達質粒,利用大腸桿菌錶達繫統穫得原覈蛋白,在小鼠模型上評價其細胞免疫學特性.方法 通過PCR擴增齣lhp-linker-esat6-linker和linker-Rv2654c片段,構建正確的pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原覈錶達質粒,轉化BL21(DE3)後在IPTG誘導下錶達,併純化該融閤蛋白,western blot驗證蛋白的免疫原性,通過T細胞增殖實驗和夾心ELISA評價其細胞免疫學特性.結果 成功構建pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原覈錶達質粒,SDS-PAGE顯示在45 kDa處齣現目的 條帶,Western blot證明融閤蛋白對anti-ESAT6,anti-CFP10,anti-His單抗和rGST-TB7.7多抗血清均有反應,說明該融閤蛋白具有良好的免疫反應性,T淋巴細胞增殖實驗顯示該蛋白能明顯引起小鼠的T細胞免疫反應.夾心ELISA實驗也錶明,融閤蛋白刺激產生的IFN-γ和IL-4水平與對照組相比均有顯著性差異,同時融閤蛋白誘導產生的IFN-γ水平明顯高于IL-4.結論 CFP10-ESAT6-TB7.7融閤蛋白在大腸桿菌繫統中實現可溶性錶達,併穫得免疫反應性良好的純化產物,該融閤蛋白能引起明顯的T細胞增殖,具有誘導Th1型免疫應答的特性.
목적 구건결핵분지간균CFP10-ESAT6-TB7.7융합단백적표체질립,이용대장간균표체계통획득원핵단백,재소서모형상평개기세포면역학특성.방법 통과PCR확증출lhp-linker-esat6-linker화linker-Rv2654c편단,구건정학적pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c원핵표체질립,전화BL21(DE3)후재IPTG유도하표체,병순화해융합단백,western blot험증단백적면역원성,통과T세포증식실험화협심ELISA평개기세포면역학특성.결과 성공구건pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c원핵표체질립,SDS-PAGE현시재45 kDa처출현목적 조대,Western blot증명융합단백대anti-ESAT6,anti-CFP10,anti-His단항화rGST-TB7.7다항혈청균유반응,설명해융합단백구유량호적면역반응성,T림파세포증식실험현시해단백능명현인기소서적T세포면역반응.협심ELISA실험야표명,융합단백자격산생적IFN-γ화IL-4수평여대조조상비균유현저성차이,동시융합단백유도산생적IFN-γ수평명현고우IL-4.결론 CFP10-ESAT6-TB7.7융합단백재대장간균계통중실현가용성표체,병획득면역반응성량호적순화산물,해융합단백능인기명현적T세포증식,구유유도Th1형면역응답적특성.
