中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2014年
2期
125-129
,共5页
吴巨龙%王绚%吕刚%苏娟%逯召莲%孙萃萍%景涛
吳巨龍%王絢%呂剛%囌娟%逯召蓮%孫萃萍%景濤
오거룡%왕현%려강%소연%록소련%손췌평%경도
细粒棘球绦虫%甘油醛3-磷酸脱氢酶%生物信息学%原核表达%酶活性检测
細粒棘毬縚蟲%甘油醛3-燐痠脫氫酶%生物信息學%原覈錶達%酶活性檢測
세립극구조충%감유철3-린산탈경매%생물신식학%원핵표체%매활성검측
目的 以生物信息学预测细粒棘球绦虫甘油醛3-磷酸脱氢酶(EgGAPDH)编码基因及其编码蛋白的结构和功能,利用大肠杆菌原核表达系统高效表达EgGAPDH重组蛋白,体外检测其酶活性.方法 运用各软件对EgGAPDH的理化性质、保守功能域、系统发生树和二级结构、三级结构等方面进行分析后,将EgGAPDH基因亚克隆于表达载体pET30a(+),转化入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,表达、纯化重组蛋白,并利用底物3-磷酸甘油醛测定重组蛋白EgGAPDH的酶催化活性.结果 EgGAPDH cDNA序列长度为1 011 bp,编码一个336个氨基酸的蛋白.该GAPDH蛋白理论相对分子质量为36 128.3 Da,等电点为8.44,具有GAPDH蛋白家族的两个功能结构域,富含6种类型的特定功能位点.成功构建的原核表达载体pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效表达,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清,制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活检测显示其具有高效酶活性.结论 EgGAPDH基因可在原核系统中获得有酶催化活性的高效表达,为进一步研究其在糖代谢中的功能奠定了基础.
目的 以生物信息學預測細粒棘毬縚蟲甘油醛3-燐痠脫氫酶(EgGAPDH)編碼基因及其編碼蛋白的結構和功能,利用大腸桿菌原覈錶達繫統高效錶達EgGAPDH重組蛋白,體外檢測其酶活性.方法 運用各軟件對EgGAPDH的理化性質、保守功能域、繫統髮生樹和二級結構、三級結構等方麵進行分析後,將EgGAPDH基因亞剋隆于錶達載體pET30a(+),轉化入E.coli BL21(DE3)感受態細菌,錶達、純化重組蛋白,併利用底物3-燐痠甘油醛測定重組蛋白EgGAPDH的酶催化活性.結果 EgGAPDH cDNA序列長度為1 011 bp,編碼一箇336箇氨基痠的蛋白.該GAPDH蛋白理論相對分子質量為36 128.3 Da,等電點為8.44,具有GAPDH蛋白傢族的兩箇功能結構域,富含6種類型的特定功能位點.成功構建的原覈錶達載體pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效錶達,且髮現錶達產物主要以可溶形式分佈于裂解上清,製備甘油醛3-燐痠脫氫酶純品併通過酶活檢測顯示其具有高效酶活性.結論 EgGAPDH基因可在原覈繫統中穫得有酶催化活性的高效錶達,為進一步研究其在糖代謝中的功能奠定瞭基礎.
목적 이생물신식학예측세립극구조충감유철3-린산탈경매(EgGAPDH)편마기인급기편마단백적결구화공능,이용대장간균원핵표체계통고효표체EgGAPDH중조단백,체외검측기매활성.방법 운용각연건대EgGAPDH적이화성질、보수공능역、계통발생수화이급결구、삼급결구등방면진행분석후,장EgGAPDH기인아극륭우표체재체pET30a(+),전화입E.coli BL21(DE3)감수태세균,표체、순화중조단백,병이용저물3-린산감유철측정중조단백EgGAPDH적매최화활성.결과 EgGAPDH cDNA서렬장도위1 011 bp,편마일개336개안기산적단백.해GAPDH단백이론상대분자질량위36 128.3 Da,등전점위8.44,구유GAPDH단백가족적량개공능결구역,부함6충류형적특정공능위점.성공구건적원핵표체재체pET30a(+)-EgGAPDH재E.coli BL21(DE3)중고효표체,차발현표체산물주요이가용형식분포우렬해상청,제비감유철3-린산탈경매순품병통과매활검측현시기구유고효매활성.결론 EgGAPDH기인가재원핵계통중획득유매최화활성적고효표체,위진일보연구기재당대사중적공능전정료기출.
