江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
1期
162-166
,共5页
王安平%朱善元%吴双%王永娟%左伟勇%洪伟鸣
王安平%硃善元%吳雙%王永娟%左偉勇%洪偉鳴
왕안평%주선원%오쌍%왕영연%좌위용%홍위명
禽腺联病毒%VP基因%昆虫细胞%表达
禽腺聯病毒%VP基因%昆蟲細胞%錶達
금선련병독%VP기인%곤충세포%표체
avian adeno-associated virus%VP gene%insect cell%expression
为同时在昆虫细胞中按照合适比例表达禽腺联病毒的3个结构蛋白质,首先根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组转移载体pFastBac-VP,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP.SDS-PAGE结果分析表明,3个结构蛋白质VP1、VP2和VP3均获得了表达,分子量正确,且比例为1:1:10.Western blot结果显示,表达的重组蛋白质能够与VP3多抗反应.以上结果说明禽腺联病毒的3个结构蛋白质均在昆虫细胞中获得了成功表达.
為同時在昆蟲細胞中按照閤適比例錶達禽腺聯病毒的3箇結構蛋白質,首先根據禽腺聯病毒VP基因序列設計引物,擴增VP基因,將其剋隆至桿狀病毒錶達載體pFastBac1,穫得重組轉移載體pFastBac-VP,將其轉化到DH10Bac感受態細胞中,經抗性和藍白斑篩選,穫得重組穿梭質粒rBacmid-VP,在脂質體的介導下轉染昆蟲細胞Sf9,穫得重組桿狀病毒rBac-VP.SDS-PAGE結果分析錶明,3箇結構蛋白質VP1、VP2和VP3均穫得瞭錶達,分子量正確,且比例為1:1:10.Western blot結果顯示,錶達的重組蛋白質能夠與VP3多抗反應.以上結果說明禽腺聯病毒的3箇結構蛋白質均在昆蟲細胞中穫得瞭成功錶達.
위동시재곤충세포중안조합괄비례표체금선련병독적3개결구단백질,수선근거금선련병독VP기인서렬설계인물,확증VP기인,장기극륭지간상병독표체재체pFastBac1,획득중조전이재체pFastBac-VP,장기전화도DH10Bac감수태세포중,경항성화람백반사선,획득중조천사질립rBacmid-VP,재지질체적개도하전염곤충세포Sf9,획득중조간상병독rBac-VP.SDS-PAGE결과분석표명,3개결구단백질VP1、VP2화VP3균획득료표체,분자량정학,차비례위1:1:10.Western blot결과현시,표체적중조단백질능구여VP3다항반응.이상결과설명금선련병독적3개결구단백질균재곤충세포중획득료성공표체.
