江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
1期
156-161
,共6页
于建宁%潘伟芹%王公金%徐小波%李燕%于峰祥
于建寧%潘偉芹%王公金%徐小波%李燕%于峰祥
우건저%반위근%왕공금%서소파%리연%우봉상
SQR基因%pLEB590%乳酸菌%重组载体
SQR基因%pLEB590%乳痠菌%重組載體
SQR기인%pLEB590%유산균%중조재체
SQR gene%pLEB590%lactic acid bacterium%recombinant vector
为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pLEB590-SQR的构建及其在乳酸乳球菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切载体pLEB590与目的片段SQR,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过电转化法转化到乳酸菌中,提取所得到的乳酸乳球菌质粒pLEB590-SQR进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定；并通过电转化将重组质粒导入乳酸乳球菌MG1363中,在含有Nisin(乳酸链球菌素)的选择培养基中筛选阳性克隆,采用SDS-PAGE电泳和Western杂交检测SQR蛋白质的表达情况.最后检测重组质粒在MG1363中的遗传稳定性.结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pLEB590-SQR构建成功,从MG1363中成功检测到目的蛋白质SQR的表达,携带pLEB590-SQR的MG1363遗传稳定性达90％以上.乳酸乳球菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR).
為瞭研究硫化物-醌氧化還原酶(SQR)基因的乳痠菌錶達載體pLEB590-SQR的構建及其在乳痠乳毬菌MG1363中的錶達,通過限製性內切酶酶切載體pLEB590與目的片段SQR,迴收純化併用T4連接酶進行連接,連接產物通過電轉化法轉化到乳痠菌中,提取所得到的乳痠乳毬菌質粒pLEB590-SQR進行雙酶切鑒定與普通PCR鑒定；併通過電轉化將重組質粒導入乳痠乳毬菌MG1363中,在含有Nisin(乳痠鏈毬菌素)的選擇培養基中篩選暘性剋隆,採用SDS-PAGE電泳和Western雜交檢測SQR蛋白質的錶達情況.最後檢測重組質粒在MG1363中的遺傳穩定性.結果顯示,SQR乳痠菌重組錶達載體pLEB590-SQR構建成功,從MG1363中成功檢測到目的蛋白質SQR的錶達,攜帶pLEB590-SQR的MG1363遺傳穩定性達90％以上.乳痠乳毬菌MG1363可以用來錶達硫化物-醌氧化還原酶(SQR).
위료연구류화물-곤양화환원매(SQR)기인적유산균표체재체pLEB590-SQR적구건급기재유산유구균MG1363중적표체,통과한제성내절매매절재체pLEB590여목적편단SQR,회수순화병용T4련접매진행련접,련접산물통과전전화법전화도유산균중,제취소득도적유산유구균질립pLEB590-SQR진행쌍매절감정여보통PCR감정；병통과전전화장중조질립도입유산유구균MG1363중,재함유Nisin(유산련구균소)적선택배양기중사선양성극륭,채용SDS-PAGE전영화Western잡교검측SQR단백질적표체정황.최후검측중조질립재MG1363중적유전은정성.결과현시,SQR유산균중조표체재체pLEB590-SQR구건성공,종MG1363중성공검측도목적단백질SQR적표체,휴대pLEB590-SQR적MG1363유전은정성체90％이상.유산유구균MG1363가이용래표체류화물-곤양화환원매(SQR).
