江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
1期
144-149
,共6页
王永娟%朱善元%王岑%左伟勇
王永娟%硃善元%王岑%左偉勇
왕영연%주선원%왕잠%좌위용
传染性法氏囊病毒%重组禽腺联病毒%miRNA
傳染性法氏囊病毒%重組禽腺聯病毒%miRNA
전염성법씨낭병독%중조금선련병독%miRNA
infectious bursal disease virus (IBDV)%recombinant avian adeno-associated virus%miRNA
为了研究重组禽腺联病毒介导的基因特异miRNAs对传染性法氏囊病毒(IBDV)复制的抑制作用.在前期研究基础上,利用重组DNA技术构建表达vp2与vp1基因特异miRNAs的重组禽腺联病毒转移载体,磷酸钙法制备重组禽腺联病毒；纯化后的病毒经过电镜观察、病毒感染性试验确定其存在与感染滴度,提取转导重组病毒后的细胞总RNA,RT-PCR法检测miRNAs表达情况,在重组病毒转导的细胞中感染不同源的IBDV,在感染后不同时间测定病毒TCID50及vp2基因表达水平.结果显示,成功制备了重组禽腺联病毒,病毒感染性滴度可达5×108 TU/ml,与阴性对照相比,成功表达的miRNA能在细胞上抑制病毒基因的扩增,大幅度降低同源或异源病毒的滴度.表明重组禽腺联病毒可以作为有效传送和稳定表达miRNA的载体,有望开发预防鸡传染性法氏囊病(IBD)的新方法.
為瞭研究重組禽腺聯病毒介導的基因特異miRNAs對傳染性法氏囊病毒(IBDV)複製的抑製作用.在前期研究基礎上,利用重組DNA技術構建錶達vp2與vp1基因特異miRNAs的重組禽腺聯病毒轉移載體,燐痠鈣法製備重組禽腺聯病毒；純化後的病毒經過電鏡觀察、病毒感染性試驗確定其存在與感染滴度,提取轉導重組病毒後的細胞總RNA,RT-PCR法檢測miRNAs錶達情況,在重組病毒轉導的細胞中感染不同源的IBDV,在感染後不同時間測定病毒TCID50及vp2基因錶達水平.結果顯示,成功製備瞭重組禽腺聯病毒,病毒感染性滴度可達5×108 TU/ml,與陰性對照相比,成功錶達的miRNA能在細胞上抑製病毒基因的擴增,大幅度降低同源或異源病毒的滴度.錶明重組禽腺聯病毒可以作為有效傳送和穩定錶達miRNA的載體,有望開髮預防鷄傳染性法氏囊病(IBD)的新方法.
위료연구중조금선련병독개도적기인특이miRNAs대전염성법씨낭병독(IBDV)복제적억제작용.재전기연구기출상,이용중조DNA기술구건표체vp2여vp1기인특이miRNAs적중조금선련병독전이재체,린산개법제비중조금선련병독；순화후적병독경과전경관찰、병독감염성시험학정기존재여감염적도,제취전도중조병독후적세포총RNA,RT-PCR법검측miRNAs표체정황,재중조병독전도적세포중감염불동원적IBDV,재감염후불동시간측정병독TCID50급vp2기인표체수평.결과현시,성공제비료중조금선련병독,병독감염성적도가체5×108 TU/ml,여음성대조상비,성공표체적miRNA능재세포상억제병독기인적확증,대폭도강저동원혹이원병독적적도.표명중조금선련병독가이작위유효전송화은정표체miRNA적재체,유망개발예방계전염성법씨낭병(IBD)적신방법.
