CAJ | 학술논문

为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2) ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTv2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将其克隆至原核表达载体pcoldI中,构建原核表达质粒pcold-gl,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达.表达产物通过镍离子亲和层析柱进行纯化,用Western blot进行鉴定.将纯化的重组蛋白质免疫新西兰大白兔制备猪TTV2多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价.PCR扩增获得大小为1 227 bp的片段,重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确；重组蛋白质分子量为5.2× 104,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度可达95％以上,具有较好的抗原性；制备的多克隆抗体特异性高,抗体效价达1:12800.重组蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达,为建立TTV2间接ELISA检测方法提供了优质的包被抗原.
위료구건저수혈전파병독2형(TTV2) ORF1기인부분편단적원핵표체재체,진행원핵표체,병이용중조단백질제비저TTv2적다극륭항체,채용PCR방법확증출저TTV2 ORF1기인적부분편단,장기극륭지원핵표체재체pcoldI중,구건원핵표체질립pcold-gl,연후전화대장간균BL21(DE3),용IPTG진행유도표체.표체산물통과얼리자친화층석주진행순화,용Western blot진행감정.장순화적중조단백질면역신서란대백토제비저TTV2다극륭항체,Western blot검측항체특이성,간접ELISA검측항체효개.PCR확증획득대소위1 227 bp적편단,중조표체질립경쌍매절급측서증실구건정학；중조단백질분자량위5.2× 104,주요이포함체형식존재,순화후순도가체95％이상,구유교호적항원성；제비적다극륭항체특이성고,항체효개체1:12800.중조단백질재대장간균중득도료고효표체,위건립TTV2간접ELISA검측방법제공료우질적포피항원.