江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
1期
14-20
,共7页
申爱娟%陈松%周晓婴%戚存扣
申愛娟%陳鬆%週曉嬰%慼存釦
신애연%진송%주효영%척존구
转基因油菜%旁侧序列%事件特异性检测
轉基因油菜%徬側序列%事件特異性檢測
전기인유채%방측서렬%사건특이성검측
transgenic rapeseed%flanking sequence%event-specific detection
W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.本研究应用温度不对称PCR (TAIL-PCR)技术扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27％、A+T含量为68.73％;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6％、A+T含量为67.4％,表明该T-DNA整合在富含A/T区.依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计的2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485 bp和405 bp预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术.应用该检测技术可以从含有0.1％ W-4基因组DNA的昆合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达到0.1％.表明应用该技术可对W-4转基因事件进行特异性检测.
W-4是通過農桿菌介導法將fad2基因的反嚮重複序列錶達框轉入甘藍型油菜Westar後穫得的轉基因高油痠油菜品繫.本研究應用溫度不對稱PCR (TAIL-PCR)技術擴增穫得轉基因油菜W-4的T-DNA插入位點的左、右徬側序列.其中右邊界徬側序列長度為290 bp,其堿基組成G+C含量為31.27％、A+T含量為68.73％;左邊界徬側序列長度為365 bp,其堿基組成G+C含量為32.6％、A+T含量為67.4％,錶明該T-DNA整閤在富含A/T區.依據左、右邊界徬側序列和轉基因載體的T-DNA左右邊界序列設計的2對特異性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能從W-4基因組DNA中擴增齣大小分彆為485 bp和405 bp預期產物,而在其他轉基因油菜、非轉基因油菜的基因組DNA和空白對照中均無特異性擴增產物,據此建立瞭W-4的轉基因事件特異性PCR檢測技術.應用該檢測技術可以從含有0.1％ W-4基因組DNA的昆閤樣品中擴增齣特異產物,檢測靈敏度達到0.1％.錶明應用該技術可對W-4轉基因事件進行特異性檢測.
W-4시통과농간균개도법장fad2기인적반향중복서렬표체광전입감람형유채Westar후획득적전기인고유산유채품계.본연구응용온도불대칭PCR (TAIL-PCR)기술확증획득전기인유채W-4적T-DNA삽입위점적좌、우방측서렬.기중우변계방측서렬장도위290 bp,기감기조성G+C함량위31.27％、A+T함량위68.73％;좌변계방측서렬장도위365 bp,기감기조성G+C함량위32.6％、A+T함량위67.4％,표명해T-DNA정합재부함A/T구.의거좌、우변계방측서렬화전기인재체적T-DNA좌우변계서렬설계적2대특이성인물TLF/TLR화TRF/TRR,능종W-4기인조DNA중확증출대소분별위485 bp화405 bp예기산물,이재기타전기인유채、비전기인유채적기인조DNA화공백대조중균무특이성확증산물,거차건립료W-4적전기인사건특이성PCR검측기술.응용해검측기술가이종함유0.1％ W-4기인조DNA적곤합양품중확증출특이산물,검측령민도체도0.1％.표명응용해기술가대W-4전기인사건진행특이성검측.
