西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2014年
2期
215-224
,共10页
陈裕坤%林玉玲%田奇琳%林丽霞%赖瑞联%赖钟雄
陳裕坤%林玉玲%田奇琳%林麗霞%賴瑞聯%賴鐘雄
진유곤%림옥령%전기림%림려하%뢰서련%뢰종웅
龙眼%体细胞胚胎发生%GRAS%克隆%生物信息学%实时荧光定量PCR
龍眼%體細胞胚胎髮生%GRAS%剋隆%生物信息學%實時熒光定量PCR
용안%체세포배태발생%GRAS%극륭%생물신식학%실시형광정량PCR
longan%somatic embryogenesis%GRAS%cloning%bioinformatics%qPCR%bioinformatics analyzing
以龙眼松散型胚性愈伤组织为实验材料,采用RT-PCR结合RACE法,克隆了植物特异转录调控因子DlGRAS4和DlGRAS54的cDNA全长序列和DNA序列,并进行生物信息学以及表达分析.结果表明:DlGRAS4全长1 668 bp,开放阅读框(ORF)1 296 bp,编码431个氨基酸(GenBank登录号:KC127683)；DlGRAS54全长2 113 bp,ORF 1 659 bp,编码552个氨基酸(GenBank登录号:KC127684)；DlGRAS54的DNA序列在5'-UTR含有1个1 533 bp的内含子.生物信息学分析表明:D1GRAS4和GRAS54是不稳定亲水蛋白,不含信号肽,具有跨膜结构和GRAS家族的保守结构域,亚细胞定位于细胞膜中；与毛果杨、葡萄、蓖麻和可可等具有较高的同源性.系统进化树分析显示,DlGRAS54与拟南芥AtPAT1、葡萄VvPAT1、毛果杨PtPAT1、大豆GmPAT1处于同一分枝；DlGRAS4与拟南芥AtSCL23、玉米ZmSCL23处于同一分枝.推测DlGRAS4和DlGRAS54是GRAS基因家族的成员.qPCR结果表明,DlGRAS4在整个发育阶段转录水平呈“W”型变化趋势,在球形胚和子叶形胚阶段的表达量达最大值；DlGRAS54在整个发育阶段的转录水平呈“M”型变化趋势,在球形胚和鱼雷形胚阶段表达量达最大值,表明DlGRAS4和DlGRAS54主要在发育的中晚期起作用.外源赤霉素处理后DlGRAS4和DlGRAS54的表达量明显上调,说明DlGRAS4和DlGRAS54对赤霉素处理能做出积极的反应.
以龍眼鬆散型胚性愈傷組織為實驗材料,採用RT-PCR結閤RACE法,剋隆瞭植物特異轉錄調控因子DlGRAS4和DlGRAS54的cDNA全長序列和DNA序列,併進行生物信息學以及錶達分析.結果錶明:DlGRAS4全長1 668 bp,開放閱讀框(ORF)1 296 bp,編碼431箇氨基痠(GenBank登錄號:KC127683)；DlGRAS54全長2 113 bp,ORF 1 659 bp,編碼552箇氨基痠(GenBank登錄號:KC127684)；DlGRAS54的DNA序列在5'-UTR含有1箇1 533 bp的內含子.生物信息學分析錶明:D1GRAS4和GRAS54是不穩定親水蛋白,不含信號肽,具有跨膜結構和GRAS傢族的保守結構域,亞細胞定位于細胞膜中；與毛果楊、葡萄、蓖痳和可可等具有較高的同源性.繫統進化樹分析顯示,DlGRAS54與擬南芥AtPAT1、葡萄VvPAT1、毛果楊PtPAT1、大豆GmPAT1處于同一分枝；DlGRAS4與擬南芥AtSCL23、玉米ZmSCL23處于同一分枝.推測DlGRAS4和DlGRAS54是GRAS基因傢族的成員.qPCR結果錶明,DlGRAS4在整箇髮育階段轉錄水平呈“W”型變化趨勢,在毬形胚和子葉形胚階段的錶達量達最大值；DlGRAS54在整箇髮育階段的轉錄水平呈“M”型變化趨勢,在毬形胚和魚雷形胚階段錶達量達最大值,錶明DlGRAS4和DlGRAS54主要在髮育的中晚期起作用.外源赤黴素處理後DlGRAS4和DlGRAS54的錶達量明顯上調,說明DlGRAS4和DlGRAS54對赤黴素處理能做齣積極的反應.
이용안송산형배성유상조직위실험재료,채용RT-PCR결합RACE법,극륭료식물특이전록조공인자DlGRAS4화DlGRAS54적cDNA전장서렬화DNA서렬,병진행생물신식학이급표체분석.결과표명:DlGRAS4전장1 668 bp,개방열독광(ORF)1 296 bp,편마431개안기산(GenBank등록호:KC127683)；DlGRAS54전장2 113 bp,ORF 1 659 bp,편마552개안기산(GenBank등록호:KC127684)；DlGRAS54적DNA서렬재5'-UTR함유1개1 533 bp적내함자.생물신식학분석표명:D1GRAS4화GRAS54시불은정친수단백,불함신호태,구유과막결구화GRAS가족적보수결구역,아세포정위우세포막중；여모과양、포도、비마화가가등구유교고적동원성.계통진화수분석현시,DlGRAS54여의남개AtPAT1、포도VvPAT1、모과양PtPAT1、대두GmPAT1처우동일분지；DlGRAS4여의남개AtSCL23、옥미ZmSCL23처우동일분지.추측DlGRAS4화DlGRAS54시GRAS기인가족적성원.qPCR결과표명,DlGRAS4재정개발육계단전록수평정“W”형변화추세,재구형배화자협형배계단적표체량체최대치；DlGRAS54재정개발육계단적전록수평정“M”형변화추세,재구형배화어뢰형배계단표체량체최대치,표명DlGRAS4화DlGRAS54주요재발육적중만기기작용.외원적매소처리후DlGRAS4화DlGRAS54적표체량명현상조,설명DlGRAS4화DlGRAS54대적매소처리능주출적겁적반응.
