中华损伤与修复杂志（电子版）
中華損傷與脩複雜誌（電子版）
중화손상여수복잡지（전자판）
Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing
2013年
6期
18-22
,共5页
梁振文%李叶扬%林伟华%李罡%孙敬恩%王仁坤%王晓红
樑振文%李葉颺%林偉華%李罡%孫敬恩%王仁坤%王曉紅
량진문%리협양%림위화%리강%손경은%왕인곤%왕효홍
伤口愈合%成纤维细胞%整合素连接激酶%QLT0267
傷口愈閤%成纖維細胞%整閤素連接激酶%QLT0267
상구유합%성섬유세포%정합소련접격매%QLT0267
Wound Healing%Fibroblasts%Integrin-linked kinase%QLT0267
目的 观察不同浓度的QLT0267抑制整合素连接激酶(ILK)的活性对成纤维细胞(Fb)生物学特征的影响.方法 收集整形手术后剩余的皮肤标本,采用机械法加酶消化法分离培养Fb,随机分为空白对照组、5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组、DMSO组,其中空白对照组常规培养不做任何处理,5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组按培养基中QLT0267浓度分别为5、10、20、30 nmol/L加入QLT0267溶液[二甲基亚酮(DMSO)为溶剂],DMSO组加入与30 nM组中QLT0267溶液同体积的DMSO,分组处理12、24、48、72 h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态.CellTiter试剂盒检测分组处理24、48、72 h后各组Fb的增殖情况,并与空白对照组比较计算增殖抑制率；在48 h时间点,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况以及Western Blot法观察Fb表达磷酸化蛋白激酶B(pAKT)、总蛋白激酶B(tAKT)蛋白的变化.对数据进行LDS-t检验和重复测量设计方差分析检验.结果 经浓度大于10 nmol/L的ILK特异性抑制剂作用下,Fb膨胀,细胞核固缩或破碎,并出现细胞凋亡,随QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,细胞形态的改变更加明显.CellTiter试剂盒检测结果显示10 nmol/L以上的QLT0267能明显抑制Fb的增殖,且随着QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,增殖抑制率也升高(F处理组=94.242,P＜0.05；F时间=240.490,P＜0.05;F处理与时间=11.551,P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示与对照组比较,10 nmol/L以上的ILK特异性抑制剂能诱导Fb凋亡,差异有统计学意义(P＜0.05).Western Blot结果显示在各组tAKT的表达组间差异无统计学意义(P＞0.05)的前提下,不同浓度QLT0267组pAKT的表达比空白对照组低,并随着QLT0267浓度的上升而pAKT蛋白生成下降(P＜0.05).结论 10 nmol/L浓度以上ILK特异性抑制剂QLT0267能刺激Fb发生形态改变,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡.推测ILK可能通过影响Fb中pAKT的生成参与创面愈合过程的调控.
目的 觀察不同濃度的QLT0267抑製整閤素連接激酶(ILK)的活性對成纖維細胞(Fb)生物學特徵的影響.方法 收集整形手術後剩餘的皮膚標本,採用機械法加酶消化法分離培養Fb,隨機分為空白對照組、5 nM組、10 nM組、20 nM組、30 nM組、DMSO組,其中空白對照組常規培養不做任何處理,5 nM組、10 nM組、20 nM組、30 nM組按培養基中QLT0267濃度分彆為5、10、20、30 nmol/L加入QLT0267溶液[二甲基亞酮(DMSO)為溶劑],DMSO組加入與30 nM組中QLT0267溶液同體積的DMSO,分組處理12、24、48、72 h後在倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態.CellTiter試劑盒檢測分組處理24、48、72 h後各組Fb的增殖情況,併與空白對照組比較計算增殖抑製率；在48 h時間點,流式細胞儀檢測各組細胞凋亡情況以及Western Blot法觀察Fb錶達燐痠化蛋白激酶B(pAKT)、總蛋白激酶B(tAKT)蛋白的變化.對數據進行LDS-t檢驗和重複測量設計方差分析檢驗.結果 經濃度大于10 nmol/L的ILK特異性抑製劑作用下,Fb膨脹,細胞覈固縮或破碎,併齣現細胞凋亡,隨QLT0267濃度的增高和刺激時間的延長,細胞形態的改變更加明顯.CellTiter試劑盒檢測結果顯示10 nmol/L以上的QLT0267能明顯抑製Fb的增殖,且隨著QLT0267濃度的增高和刺激時間的延長,增殖抑製率也升高(F處理組=94.242,P＜0.05；F時間=240.490,P＜0.05;F處理與時間=11.551,P＜0.05).流式細胞儀檢測結果顯示與對照組比較,10 nmol/L以上的ILK特異性抑製劑能誘導Fb凋亡,差異有統計學意義(P＜0.05).Western Blot結果顯示在各組tAKT的錶達組間差異無統計學意義(P＞0.05)的前提下,不同濃度QLT0267組pAKT的錶達比空白對照組低,併隨著QLT0267濃度的上升而pAKT蛋白生成下降(P＜0.05).結論 10 nmol/L濃度以上ILK特異性抑製劑QLT0267能刺激Fb髮生形態改變,抑製細胞增殖和促進細胞凋亡.推測ILK可能通過影響Fb中pAKT的生成參與創麵愈閤過程的調控.
목적 관찰불동농도적QLT0267억제정합소련접격매(ILK)적활성대성섬유세포(Fb)생물학특정적영향.방법 수집정형수술후잉여적피부표본,채용궤계법가매소화법분리배양Fb,수궤분위공백대조조、5 nM조、10 nM조、20 nM조、30 nM조、DMSO조,기중공백대조조상규배양불주임하처리,5 nM조、10 nM조、20 nM조、30 nM조안배양기중QLT0267농도분별위5、10、20、30 nmol/L가입QLT0267용액[이갑기아동(DMSO)위용제],DMSO조가입여30 nM조중QLT0267용액동체적적DMSO,분조처리12、24、48、72 h후재도치상차현미경하관찰세포형태.CellTiter시제합검측분조처리24、48、72 h후각조Fb적증식정황,병여공백대조조비교계산증식억제솔；재48 h시간점,류식세포의검측각조세포조망정황이급Western Blot법관찰Fb표체린산화단백격매B(pAKT)、총단백격매B(tAKT)단백적변화.대수거진행LDS-t검험화중복측량설계방차분석검험.결과 경농도대우10 nmol/L적ILK특이성억제제작용하,Fb팽창,세포핵고축혹파쇄,병출현세포조망,수QLT0267농도적증고화자격시간적연장,세포형태적개변경가명현.CellTiter시제합검측결과현시10 nmol/L이상적QLT0267능명현억제Fb적증식,차수착QLT0267농도적증고화자격시간적연장,증식억제솔야승고(F처리조=94.242,P＜0.05；F시간=240.490,P＜0.05;F처리여시간=11.551,P＜0.05).류식세포의검측결과현시여대조조비교,10 nmol/L이상적ILK특이성억제제능유도Fb조망,차이유통계학의의(P＜0.05).Western Blot결과현시재각조tAKT적표체조간차이무통계학의의(P＞0.05)적전제하,불동농도QLT0267조pAKT적표체비공백대조조저,병수착QLT0267농도적상승이pAKT단백생성하강(P＜0.05).결론 10 nmol/L농도이상ILK특이성억제제QLT0267능자격Fb발생형태개변,억제세포증식화촉진세포조망.추측ILK가능통과영향Fb중pAKT적생성삼여창면유합과정적조공.
