中华损伤与修复杂志（电子版）
中華損傷與脩複雜誌（電子版）
중화손상여수복잡지（전자판）
Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing
2013年
6期
13-17
,共5页
谢松涛%贾文斌%白晓智%陶克%韩夫%方小兵%杨龙龙%蔡维霞%汤朝武
謝鬆濤%賈文斌%白曉智%陶剋%韓伕%方小兵%楊龍龍%蔡維霞%湯朝武
사송도%가문빈%백효지%도극%한부%방소병%양룡룡%채유하%탕조무
烧伤%脂肪间充质干细胞%血清%细胞治疗%生物学特性
燒傷%脂肪間充質榦細胞%血清%細胞治療%生物學特性
소상%지방간충질간세포%혈청%세포치료%생물학특성
Burns%Adipose-derived stem cells%Serum%Cell therapy%Biological characteristics
目的 探讨严重烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响.方法 取雄性SD大鼠双侧腹股沟脂肪组织,采用胶原酶消化法、分离纯化大鼠ADSCs,取第3代细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面标志物,行成脂成骨诱导分化鉴定；ADSCs传代后按随机数字表法分为10％胎牛血清组(正常培养组)、10％正常大鼠血清组,10％烧伤大鼠血清组,采用噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞的生长曲线.通过流式细胞仪检测各组细胞的生长周期、Real-time PCR法检测各组细胞血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡相关因子Caspase-3的表达情况.结果 分离培养的ADSCs传至第3代时形态规则,经流式细胞仪检测,所培养的ADSCs均表达CD29、CD90、CD105,阳性率分别为88.6％、99.7％、92.8％,而CD31、CD34、CD45阳性率分别为4.4％、4.7％、3.3％；经诱导培养后可向成骨成脂分化.MTT法检测结果显示:10％烧伤大鼠血清组细胞增殖较快,各时间点吸光度值(A值)明显高于10％胎牛血清组及10％正常大鼠血清组.流式细胞仪检测结果显示:培养1周后10％烧伤大鼠血清组、10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组ADSCs G1期细胞比例分别为:(72.20±5.13)％、(83.50±4.74)％、(90.20±6.37)％；S期细胞比例分别为:(21.40±2.84)％、(12.50±1.96)％和(8.60±1.31)％,10％烧伤大鼠血清组ADSCs G1期细胞比例显著低于10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组(t=2.39、4.86;P ＜0.05)；10％烧伤大鼠血清组ADSCs S期细胞比例显著高于10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组(=5.54,7.93;P＜0.01).Real-Time PCR检测结果显示:10％烧伤大鼠血清组VEGF的表达明显上调,Caspase-3表达显著下调与10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 10％烧伤大鼠血清可明显促进ADSCs的增殖、抑制细胞凋亡发生、促进ADSCs的分泌功能,严重烧伤后可望移植ADSCs用于细胞治疗.
目的 探討嚴重燒傷大鼠血清對體外培養的大鼠脂肪間充質榦細胞(ADSCs)生物學特性的影響.方法 取雄性SD大鼠雙側腹股溝脂肪組織,採用膠原酶消化法、分離純化大鼠ADSCs,取第3代細胞,採用流式細胞儀檢測細胞錶麵標誌物,行成脂成骨誘導分化鑒定；ADSCs傳代後按隨機數字錶法分為10％胎牛血清組(正常培養組)、10％正常大鼠血清組,10％燒傷大鼠血清組,採用噻唑藍(MTT)法測定各組細胞的生長麯線.通過流式細胞儀檢測各組細胞的生長週期、Real-time PCR法檢測各組細胞血管內皮生長因子(VEGF)、凋亡相關因子Caspase-3的錶達情況.結果 分離培養的ADSCs傳至第3代時形態規則,經流式細胞儀檢測,所培養的ADSCs均錶達CD29、CD90、CD105,暘性率分彆為88.6％、99.7％、92.8％,而CD31、CD34、CD45暘性率分彆為4.4％、4.7％、3.3％；經誘導培養後可嚮成骨成脂分化.MTT法檢測結果顯示:10％燒傷大鼠血清組細胞增殖較快,各時間點吸光度值(A值)明顯高于10％胎牛血清組及10％正常大鼠血清組.流式細胞儀檢測結果顯示:培養1週後10％燒傷大鼠血清組、10％正常大鼠血清組、10％胎牛血清組ADSCs G1期細胞比例分彆為:(72.20±5.13)％、(83.50±4.74)％、(90.20±6.37)％；S期細胞比例分彆為:(21.40±2.84)％、(12.50±1.96)％和(8.60±1.31)％,10％燒傷大鼠血清組ADSCs G1期細胞比例顯著低于10％正常大鼠血清組、10％胎牛血清組(t=2.39、4.86;P ＜0.05)；10％燒傷大鼠血清組ADSCs S期細胞比例顯著高于10％正常大鼠血清組、10％胎牛血清組(=5.54,7.93;P＜0.01).Real-Time PCR檢測結果顯示:10％燒傷大鼠血清組VEGF的錶達明顯上調,Caspase-3錶達顯著下調與10％正常大鼠血清組、10％胎牛血清組相比差異均有統計學意義(P＜0.05).結論 10％燒傷大鼠血清可明顯促進ADSCs的增殖、抑製細胞凋亡髮生、促進ADSCs的分泌功能,嚴重燒傷後可望移植ADSCs用于細胞治療.
목적 탐토엄중소상대서혈청대체외배양적대서지방간충질간세포(ADSCs)생물학특성적영향.방법 취웅성SD대서쌍측복고구지방조직,채용효원매소화법、분리순화대서ADSCs,취제3대세포,채용류식세포의검측세포표면표지물,행성지성골유도분화감정；ADSCs전대후안수궤수자표법분위10％태우혈청조(정상배양조)、10％정상대서혈청조,10％소상대서혈청조,채용새서람(MTT)법측정각조세포적생장곡선.통과류식세포의검측각조세포적생장주기、Real-time PCR법검측각조세포혈관내피생장인자(VEGF)、조망상관인자Caspase-3적표체정황.결과 분리배양적ADSCs전지제3대시형태규칙,경류식세포의검측,소배양적ADSCs균표체CD29、CD90、CD105,양성솔분별위88.6％、99.7％、92.8％,이CD31、CD34、CD45양성솔분별위4.4％、4.7％、3.3％；경유도배양후가향성골성지분화.MTT법검측결과현시:10％소상대서혈청조세포증식교쾌,각시간점흡광도치(A치)명현고우10％태우혈청조급10％정상대서혈청조.류식세포의검측결과현시:배양1주후10％소상대서혈청조、10％정상대서혈청조、10％태우혈청조ADSCs G1기세포비례분별위:(72.20±5.13)％、(83.50±4.74)％、(90.20±6.37)％；S기세포비례분별위:(21.40±2.84)％、(12.50±1.96)％화(8.60±1.31)％,10％소상대서혈청조ADSCs G1기세포비례현저저우10％정상대서혈청조、10％태우혈청조(t=2.39、4.86;P ＜0.05)；10％소상대서혈청조ADSCs S기세포비례현저고우10％정상대서혈청조、10％태우혈청조(=5.54,7.93;P＜0.01).Real-Time PCR검측결과현시:10％소상대서혈청조VEGF적표체명현상조,Caspase-3표체현저하조여10％정상대서혈청조、10％태우혈청조상비차이균유통계학의의(P＜0.05).결론 10％소상대서혈청가명현촉진ADSCs적증식、억제세포조망발생、촉진ADSCs적분비공능,엄중소상후가망이식ADSCs용우세포치료.
