西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
2期
152-156
,共5页
王素琴%牛小麟%朱延河%高登峰%林琳
王素琴%牛小麟%硃延河%高登峰%林琳
왕소금%우소린%주연하%고등봉%림림
GPx-1基因%Pro198Leu多态%真核表达载体%转染%H9C2细胞%硒
GPx-1基因%Pro198Leu多態%真覈錶達載體%轉染%H9C2細胞%硒
GPx-1기인%Pro198Leu다태%진핵표체재체%전염%H9C2세포%서
目的 构建含有人GPx-1基因Pro198Leu多态的真核表达载体,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制提供依据.方法采用全基因合成的方法合成含多态位点的人GPx-1基因cDNA片段,同时在基因5′端和3′端分别引入BamHⅠ和NotⅠ酶切位点,通过限制性内切酶酶切目的 片段和真核表达载体pEGFP-N3,再用T4 DNA连接酶将含有目的 基因的片段定向插入到载体pEGFP-N3真核人巨细胞病毒启动子下游.连接产物转化至DH5α中.挑取克隆、提取质粒进行鉴定.将hGPx-1-198Leu真核表达载体转染HEK293细胞,观察转染效率,并采用RT-PCR检测转染重组载体后细胞中GPx-1的mRNA表达水平.重组载体转染H9C2细胞,观察补硒之后的GPx-1表达情况.结果 获得目的 基因cDNA片段全长869bp,PCR和测序鉴定载体中含有人GPx-1-198Leu基因cDNA.重组载体转染HEK293细胞后检测到GPx-1的mRNA水平比未转染组及空质粒转染组明显升高,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制奠定了基础.H9C2细胞在转染后GPx-1蛋白水平升高并且随着硒浓度的升高而升高.结论 成功构建了含Pro198Leu多态位点的hGPx-1真核表达载体,并且也插入了保证该基因有效表达的硒代半胱氨酸插入序列.
目的 構建含有人GPx-1基因Pro198Leu多態的真覈錶達載體,為深入研究GPx-1基因Pro198Leu多態在相關疾病中的作用與機製提供依據.方法採用全基因閤成的方法閤成含多態位點的人GPx-1基因cDNA片段,同時在基因5′耑和3′耑分彆引入BamHⅠ和NotⅠ酶切位點,通過限製性內切酶酶切目的 片段和真覈錶達載體pEGFP-N3,再用T4 DNA連接酶將含有目的 基因的片段定嚮插入到載體pEGFP-N3真覈人巨細胞病毒啟動子下遊.連接產物轉化至DH5α中.挑取剋隆、提取質粒進行鑒定.將hGPx-1-198Leu真覈錶達載體轉染HEK293細胞,觀察轉染效率,併採用RT-PCR檢測轉染重組載體後細胞中GPx-1的mRNA錶達水平.重組載體轉染H9C2細胞,觀察補硒之後的GPx-1錶達情況.結果 穫得目的 基因cDNA片段全長869bp,PCR和測序鑒定載體中含有人GPx-1-198Leu基因cDNA.重組載體轉染HEK293細胞後檢測到GPx-1的mRNA水平比未轉染組及空質粒轉染組明顯升高,為深入研究GPx-1基因Pro198Leu多態在相關疾病中的作用與機製奠定瞭基礎.H9C2細胞在轉染後GPx-1蛋白水平升高併且隨著硒濃度的升高而升高.結論 成功構建瞭含Pro198Leu多態位點的hGPx-1真覈錶達載體,併且也插入瞭保證該基因有效錶達的硒代半胱氨痠插入序列.
목적 구건함유인GPx-1기인Pro198Leu다태적진핵표체재체,위심입연구GPx-1기인Pro198Leu다태재상관질병중적작용여궤제제공의거.방법채용전기인합성적방법합성함다태위점적인GPx-1기인cDNA편단,동시재기인5′단화3′단분별인입BamHⅠ화NotⅠ매절위점,통과한제성내절매매절목적 편단화진핵표체재체pEGFP-N3,재용T4 DNA련접매장함유목적 기인적편단정향삽입도재체pEGFP-N3진핵인거세포병독계동자하유.련접산물전화지DH5α중.도취극륭、제취질립진행감정.장hGPx-1-198Leu진핵표체재체전염HEK293세포,관찰전염효솔,병채용RT-PCR검측전염중조재체후세포중GPx-1적mRNA표체수평.중조재체전염H9C2세포,관찰보서지후적GPx-1표체정황.결과 획득목적 기인cDNA편단전장869bp,PCR화측서감정재체중함유인GPx-1-198Leu기인cDNA.중조재체전염HEK293세포후검측도GPx-1적mRNA수평비미전염조급공질립전염조명현승고,위심입연구GPx-1기인Pro198Leu다태재상관질병중적작용여궤제전정료기출.H9C2세포재전염후GPx-1단백수평승고병차수착서농도적승고이승고.결론 성공구건료함Pro198Leu다태위점적hGPx-1진핵표체재체,병차야삽입료보증해기인유효표체적서대반광안산삽입서렬.
