西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
2期
147-151,162
,共6页
CTLA4.FasL%肝前体细胞%异种免疫排斥反应%增殖%分化
CTLA4.FasL%肝前體細胞%異種免疫排斥反應%增殖%分化
CTLA4.FasL%간전체세포%이충면역배척반응%증식%분화
目的 探讨融合蛋白CTLA4.FasL对肝前体细胞(LEPCs)增殖分化潜能的影响及抑制异种排斥反应的效应.方法克隆CTLA4.FasL基因,构建携带CTLA4.FasL基因与红色荧光蛋白(mCherry)双顺反子结构的重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry.优化慢病毒感染LEPCs的条件,建立高表达CTLA4.FasL的LEPCs,荧光显微镜观察mCherry的表达,Western blot检测CTLA4.FasL的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞培养上清中CTLA4.FasL的浓度,水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞的增殖活性,Real time PCR(RT-PCR)检测干细胞相关基因CK19和c-Kit mRNA的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)掺入法测定CTLA4.FasL-LEPCs在异种混合淋巴细胞培养体系中对大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用.结果 构建重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry,病毒滴度为2×108 TU/mL.在感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10,聚凝胺质量浓度是5μg/mL时,感染效率约90%.Western blot证实了CTLA4.FasL的表达,在细胞培养上清中其质量浓度约为(0.72±0.10)μg/mL.CTLA4.FasL-LEPCs细胞增殖活性未受到影响,CK19和c-Kit基因mRNA表达水平无变化.CTLA4.FasL-LEPCs细胞可显著抑制大鼠淋巴细胞的增殖(P<0.05).结论 构建成功的重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry可介导CTLA4.FasL基因在LEPCs中高效表达;CTLA4.FasL可有效地抑制异种排斥反应,同时不损害LEPCs增殖活性和分化潜能.
目的 探討融閤蛋白CTLA4.FasL對肝前體細胞(LEPCs)增殖分化潛能的影響及抑製異種排斥反應的效應.方法剋隆CTLA4.FasL基因,構建攜帶CTLA4.FasL基因與紅色熒光蛋白(mCherry)雙順反子結構的重組慢病毒載體Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry.優化慢病毒感染LEPCs的條件,建立高錶達CTLA4.FasL的LEPCs,熒光顯微鏡觀察mCherry的錶達,Western blot檢測CTLA4.FasL的錶達,酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定細胞培養上清中CTLA4.FasL的濃度,水溶性四氮唑(WST-1)法檢測細胞的增殖活性,Real time PCR(RT-PCR)檢測榦細胞相關基因CK19和c-Kit mRNA的錶達,5-溴脫氧尿嘧啶覈苷(Brdu)摻入法測定CTLA4.FasL-LEPCs在異種混閤淋巴細胞培養體繫中對大鼠淋巴細胞增殖的抑製作用.結果 構建重組慢病毒載體Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry,病毒滴度為2×108 TU/mL.在感染複數(multiplicity of infection,MOI)為10,聚凝胺質量濃度是5μg/mL時,感染效率約90%.Western blot證實瞭CTLA4.FasL的錶達,在細胞培養上清中其質量濃度約為(0.72±0.10)μg/mL.CTLA4.FasL-LEPCs細胞增殖活性未受到影響,CK19和c-Kit基因mRNA錶達水平無變化.CTLA4.FasL-LEPCs細胞可顯著抑製大鼠淋巴細胞的增殖(P<0.05).結論 構建成功的重組慢病毒載體Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry可介導CTLA4.FasL基因在LEPCs中高效錶達;CTLA4.FasL可有效地抑製異種排斥反應,同時不損害LEPCs增殖活性和分化潛能.
목적 탐토융합단백CTLA4.FasL대간전체세포(LEPCs)증식분화잠능적영향급억제이충배척반응적효응.방법극륭CTLA4.FasL기인,구건휴대CTLA4.FasL기인여홍색형광단백(mCherry)쌍순반자결구적중조만병독재체Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry.우화만병독감염LEPCs적조건,건립고표체CTLA4.FasL적LEPCs,형광현미경관찰mCherry적표체,Western blot검측CTLA4.FasL적표체,매련면역흡부측정법(ELISA)측정세포배양상청중CTLA4.FasL적농도,수용성사담서(WST-1)법검측세포적증식활성,Real time PCR(RT-PCR)검측간세포상관기인CK19화c-Kit mRNA적표체,5-추탈양뇨밀정핵감(Brdu)참입법측정CTLA4.FasL-LEPCs재이충혼합림파세포배양체계중대대서림파세포증식적억제작용.결과 구건중조만병독재체Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry,병독적도위2×108 TU/mL.재감염복수(multiplicity of infection,MOI)위10,취응알질량농도시5μg/mL시,감염효솔약90%.Western blot증실료CTLA4.FasL적표체,재세포배양상청중기질량농도약위(0.72±0.10)μg/mL.CTLA4.FasL-LEPCs세포증식활성미수도영향,CK19화c-Kit기인mRNA표체수평무변화.CTLA4.FasL-LEPCs세포가현저억제대서림파세포적증식(P<0.05).결론 구건성공적중조만병독재체Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry가개도CTLA4.FasL기인재LEPCs중고효표체;CTLA4.FasL가유효지억제이충배척반응,동시불손해LEPCs증식활성화분화잠능.
