中华皮肤科杂志
中華皮膚科雜誌
중화피부과잡지
Chinese Journal of Dermatology
2014年
2期
85-89
,共5页
闵敏%张雪静%马红%许辉%李遇梅
閔敏%張雪靜%馬紅%許輝%李遇梅
민민%장설정%마홍%허휘%리우매
人脂肪间充质干细胞%分化%黑素细胞
人脂肪間充質榦細胞%分化%黑素細胞
인지방간충질간세포%분화%흑소세포
Human adipose-derived mesenchymal stem cells%Cell differentiation%Melanocytes
目的 建立体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSC)向黑素细胞分化的方法.方法 由人皮下脂肪分离培养获得hADSC,流式细胞仪检测细胞表型,成骨成脂分化证明分化潜能.将干细胞生长因子(SCF)、内皮素3(EDN-3)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等加到条件培养基中,促使第5代hADSC向黑素细胞方向诱导,诱导至第10周.未诱导组为正常对照组.使用实时荧光定量PCR检测黑素相关基因小眼畸形转录因子(MITF),酪氨酸激酶受体c-Kit(KIT),多巴色素异构酶(DCT),酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1),性别决定区域相关转录因子10(SOX10) mRNA的表达量,统计学分析采用单因素方差分析及LSD-t检验.诱导结束后,通过免疫细胞化学法、细胞免疫荧光法进行鉴定.结果 流式细胞仪显示分离培养获得的hADSC高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,阳性率均在95％以上;低表达或不表达CD31、CD34、CD45,人白细胞DR抗原(HLA-DR).成骨成脂分化结果显示hADSC具有分化潜能.实时荧光定量PCR结果显示,诱导10周后,MITF、KIT、DCT、TYR、TYRP1、SOX10 mRNA的表达水平分别为0.325±0.012,0.042±0.006,0.046±0.013,0.036±0.005,0.041±0.003,0.225±0.014,与诱导0周组相比,均有上调(P＜0.05).诱导结束后,免疫细胞化学MITF、HMB45染色阳性,细胞免疫荧光TYRP1、S100阳性表达.结论 由人脂肪间充质干细胞诱导所得细胞具有一定的黑素细胞生物学特性.
目的 建立體外誘導人脂肪間充質榦細胞(hADSC)嚮黑素細胞分化的方法.方法 由人皮下脂肪分離培養穫得hADSC,流式細胞儀檢測細胞錶型,成骨成脂分化證明分化潛能.將榦細胞生長因子(SCF)、內皮素3(EDN-3)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)等加到條件培養基中,促使第5代hADSC嚮黑素細胞方嚮誘導,誘導至第10週.未誘導組為正常對照組.使用實時熒光定量PCR檢測黑素相關基因小眼畸形轉錄因子(MITF),酪氨痠激酶受體c-Kit(KIT),多巴色素異構酶(DCT),酪氨痠酶(TYR),酪氨痠酶相關蛋白1(TYRP1),性彆決定區域相關轉錄因子10(SOX10) mRNA的錶達量,統計學分析採用單因素方差分析及LSD-t檢驗.誘導結束後,通過免疫細胞化學法、細胞免疫熒光法進行鑒定.結果 流式細胞儀顯示分離培養穫得的hADSC高錶達CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,暘性率均在95％以上;低錶達或不錶達CD31、CD34、CD45,人白細胞DR抗原(HLA-DR).成骨成脂分化結果顯示hADSC具有分化潛能.實時熒光定量PCR結果顯示,誘導10週後,MITF、KIT、DCT、TYR、TYRP1、SOX10 mRNA的錶達水平分彆為0.325±0.012,0.042±0.006,0.046±0.013,0.036±0.005,0.041±0.003,0.225±0.014,與誘導0週組相比,均有上調(P＜0.05).誘導結束後,免疫細胞化學MITF、HMB45染色暘性,細胞免疫熒光TYRP1、S100暘性錶達.結論 由人脂肪間充質榦細胞誘導所得細胞具有一定的黑素細胞生物學特性.
목적 건입체외유도인지방간충질간세포(hADSC)향흑소세포분화적방법.방법 유인피하지방분리배양획득hADSC,류식세포의검측세포표형,성골성지분화증명분화잠능.장간세포생장인자(SCF)、내피소3(EDN-3)、감성성섬유세포생장인자(bFGF)등가도조건배양기중,촉사제5대hADSC향흑소세포방향유도,유도지제10주.미유도조위정상대조조.사용실시형광정량PCR검측흑소상관기인소안기형전록인자(MITF),락안산격매수체c-Kit(KIT),다파색소이구매(DCT),락안산매(TYR),락안산매상관단백1(TYRP1),성별결정구역상관전록인자10(SOX10) mRNA적표체량,통계학분석채용단인소방차분석급LSD-t검험.유도결속후,통과면역세포화학법、세포면역형광법진행감정.결과 류식세포의현시분리배양획득적hADSC고표체CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,양성솔균재95％이상;저표체혹불표체CD31、CD34、CD45,인백세포DR항원(HLA-DR).성골성지분화결과현시hADSC구유분화잠능.실시형광정량PCR결과현시,유도10주후,MITF、KIT、DCT、TYR、TYRP1、SOX10 mRNA적표체수평분별위0.325±0.012,0.042±0.006,0.046±0.013,0.036±0.005,0.041±0.003,0.225±0.014,여유도0주조상비,균유상조(P＜0.05).유도결속후,면역세포화학MITF、HMB45염색양성,세포면역형광TYRP1、S100양성표체.결론 유인지방간충질간세포유도소득세포구유일정적흑소세포생물학특성.
