CAJ | 학술논문

实时定量RT-PCR(qRT-PCR)是进行基因表达水平分析的一种常用技术手段,而选择相对稳定的内参基因对数据进行标准化是获得可信数据的关键.本研究使用qRT-PCR技术评价8个内参基因—β-actin、GAPDH、α-Tubulin、SYN1、SYN6、RPS3、RPS18和RPL13a在磷化氢诱导后的不同品系赤拟谷盗(Tribolium castaneum)中的表达水平,采用相对定量方法并分别使用geNorm和NormFinder程序进行数据分析.其中经geNorm软件分析的8个内参基因的稳定性由高到低排列顺序为RPS18 =RPL13a (0.007)＞SYN6 (0.015) RPS3 (0.038)β-actin (0.044)α-Tubulin (0.105) SYN1 (0.154)GAPDH (0.205),且内参基因配对差异值V2/3值为0.006,从而确定内参基因的最适数目为2个,分别为RPS18和RPL13a.NormFinder与geNorm相似,其运行结果以稳定值的大小排序,经NormFinder分析的各内参基因的稳定性由高到低的排列顺序为RPS18 (0.002)＞ RPL13a(0.016)＞ β-actin(0.042) ＞RPS3(0.044) SYN6(0.055)＞α-Tubulin(0.066)＞ SYN1(O.077)＞ GAPDH (0.126),由此得出RPS18的稳定性最高,最终由该程序判定的最佳组合是RPS18和RPL13a.因此,geNorm和NormFinder两款软件的分析结果一致,最终确定相对适合的内参基因有两个:RPS18和RPL13a,该结果为赤拟谷盗基因的表达研究提供了基础资料,也为其他昆虫内参基因的筛选提供参考.
실시정량RT-PCR(qRT-PCR)시진행기인표체수평분석적일충상용기술수단,이선택상대은정적내삼기인대수거진행표준화시획득가신수거적관건.본연구사용qRT-PCR기술평개8개내삼기인—β-actin、GAPDH、α-Tubulin、SYN1、SYN6、RPS3、RPS18화RPL13a재린화경유도후적불동품계적의곡도(Tribolium castaneum)중적표체수평,채용상대정량방법병분별사용geNorm화NormFinder정서진행수거분석.기중경geNorm연건분석적8개내삼기인적은정성유고도저배렬순서위RPS18 =RPL13a (0.007)＞SYN6 (0.015) RPS3 (0.038)β-actin (0.044)α-Tubulin (0.105) SYN1 (0.154)GAPDH (0.205),차내삼기인배대차이치V2/3치위0.006,종이학정내삼기인적최괄수목위2개,분별위RPS18화RPL13a.NormFinder여geNorm상사,기운행결과이은정치적대소배서,경NormFinder분석적각내삼기인적은정성유고도저적배렬순서위RPS18 (0.002)＞ RPL13a(0.016)＞ β-actin(0.042) ＞RPS3(0.044) SYN6(0.055)＞α-Tubulin(0.066)＞ SYN1(O.077)＞ GAPDH (0.126),유차득출RPS18적은정성최고,최종유해정서판정적최가조합시RPS18화RPL13a.인차,geNorm화NormFinder량관연건적분석결과일치,최종학정상대괄합적내삼기인유량개:RPS18화RPL13a,해결과위적의곡도기인적표체연구제공료기출자료,야위기타곤충내삼기인적사선제공삼고.