CAJ | 학술논문

myf6基因属于MyoD家族成员之一,为成肌细胞分化成肌管的重要调控因子.本研究旨在克隆鹅(Anser anser)myf6基因,并进一步探讨该基因的结构与功能,揭示其在胚胎期和填饲后的表达特征.以鹅肌肉总RNA为模板,采用RACE的方法,克隆该基因全长cDNA序列,并进行生物信息学分析.运用实时荧光定量PCR检测myf6基因在鹅不同胚胎期mRNA的表达规律,以及填饲对其表达的影响.鹅myf6全长cDNA为1 196 bp,包括90 bp的5'UTR,383 bp的3'UTR和723 bp的开放阅读框(ORF),共编码240个氨基酸(GenBank登录号:JQ905627).经预测鹅myf6编码蛋白的分子量为26 214.4,等电点为5.68,平均亲水性为-0.595,为不稳定亲水蛋白.预测鹅myf6蛋白具有Basic和HLH这两个明显的结构域,bHLH蛋白结构域形成剪刀状α-螺旋二聚体,且不同物种间HLH氨基酸序列高度同源.鹅myf6基因CDS区序列与鸭(Anas platyrhynchos)同源性最高,为98.62％,与哺乳类同源性在81％左右,与鱼类同源性较低,仅62％～66％.构建的系统进化树显示,所有哺乳类、鸟类、硬骨鱼各形成一个大的分支,两栖类形成独立分支,鹅首先与绿头鸭(Anas platyrhynchos)聚成一支,分子进化地位上关系最近,其次聚类顺序较近的物种为红原鸡(Gallus gallus),该结果与这些物种在生物学上的分类是较一致的.荧光定量PCR结果显示,鹅myf6 mRNA在胚胎早期第7天就有少量的表达,7天以后表达量逐渐上升,随后在胚胎中期表达量明显升高;其在E18肌肉组织中表达量达到高峰后下降,胚胎发育后期E21myf6 mRNA的表达量是E25的近4倍,E25后逐渐趋于平稳;E18与E14、E15、E25和E28的表达差异极显著(P＜0.01),E21与E25、E28的表达也差异极显著(P＜0.01),与E14、E15的表达差异显著(P＜0.05).在鹅的胸肌和腿肌组织中,填饲组mnyf6 mRNA表达量高于对照组中该基因的表达量,且胸肌组织达到显著水平(P＜0.05).鹅myf6基因的表达具有组织特异性,该结果为进一步研究生肌调节因子myf6基因结构及其在鹅胚胎期肌肉发育中的作用提供了理论基础. myf6基因屬于MyoD傢族成員之一,為成肌細胞分化成肌管的重要調控因子.本研究旨在剋隆鵝(Anser anser)myf6基因,併進一步探討該基因的結構與功能,揭示其在胚胎期和填飼後的錶達特徵.以鵝肌肉總RNA為模闆,採用RACE的方法,剋隆該基因全長cDNA序列,併進行生物信息學分析.運用實時熒光定量PCR檢測myf6基因在鵝不同胚胎期mRNA的錶達規律,以及填飼對其錶達的影響.鵝myf6全長cDNA為1 196 bp,包括90 bp的5'UTR,383 bp的3'UTR和723 bp的開放閱讀框(ORF),共編碼240箇氨基痠(GenBank登錄號:JQ905627).經預測鵝myf6編碼蛋白的分子量為26 214.4,等電點為5.68,平均親水性為-0.595,為不穩定親水蛋白.預測鵝myf6蛋白具有Basic和HLH這兩箇明顯的結構域,bHLH蛋白結構域形成剪刀狀α-螺鏇二聚體,且不同物種間HLH氨基痠序列高度同源.鵝myf6基因CDS區序列與鴨(Anas platyrhynchos)同源性最高,為98.62％,與哺乳類同源性在81％左右,與魚類同源性較低,僅62％～66％.構建的繫統進化樹顯示,所有哺乳類、鳥類、硬骨魚各形成一箇大的分支,兩棲類形成獨立分支,鵝首先與綠頭鴨(Anas platyrhynchos)聚成一支,分子進化地位上關繫最近,其次聚類順序較近的物種為紅原鷄(Gallus gallus),該結果與這些物種在生物學上的分類是較一緻的.熒光定量PCR結果顯示,鵝myf6 mRNA在胚胎早期第7天就有少量的錶達,7天以後錶達量逐漸上升,隨後在胚胎中期錶達量明顯升高;其在E18肌肉組織中錶達量達到高峰後下降,胚胎髮育後期E21myf6 mRNA的錶達量是E25的近4倍,E25後逐漸趨于平穩;E18與E14、E15、E25和E28的錶達差異極顯著(P＜0.01),E21與E25、E28的錶達也差異極顯著(P＜0.01),與E14、E15的錶達差異顯著(P＜0.05).在鵝的胸肌和腿肌組織中,填飼組mnyf6 mRNA錶達量高于對照組中該基因的錶達量,且胸肌組織達到顯著水平(P＜0.05).鵝myf6基因的錶達具有組織特異性,該結果為進一步研究生肌調節因子myf6基因結構及其在鵝胚胎期肌肉髮育中的作用提供瞭理論基礎.
myf6기인속우MyoD가족성원지일,위성기세포분화성기관적중요조공인자.본연구지재극륭아(Anser anser)myf6기인,병진일보탐토해기인적결구여공능,게시기재배태기화전사후적표체특정.이아기육총RNA위모판,채용RACE적방법,극륭해기인전장cDNA서렬,병진행생물신식학분석.운용실시형광정량PCR검측myf6기인재아불동배태기mRNA적표체규률,이급전사대기표체적영향.아myf6전장cDNA위1 196 bp,포괄90 bp적5'UTR,383 bp적3'UTR화723 bp적개방열독광(ORF),공편마240개안기산(GenBank등록호:JQ905627).경예측아myf6편마단백적분자량위26 214.4,등전점위5.68,평균친수성위-0.595,위불은정친수단백.예측아myf6단백구유Basic화HLH저량개명현적결구역,bHLH단백결구역형성전도상α-라선이취체,차불동물충간HLH안기산서렬고도동원.아myf6기인CDS구서렬여압(Anas platyrhynchos)동원성최고,위98.62％,여포유류동원성재81％좌우,여어류동원성교저,부62％～66％.구건적계통진화수현시,소유포유류、조류、경골어각형성일개대적분지,량서류형성독립분지,아수선여록두압(Anas platyrhynchos)취성일지,분자진화지위상관계최근,기차취류순서교근적물충위홍원계(Gallus gallus),해결과여저사물충재생물학상적분류시교일치적.형광정량PCR결과현시,아myf6 mRNA재배태조기제7천취유소량적표체,7천이후표체량축점상승,수후재배태중기표체량명현승고;기재E18기육조직중표체량체도고봉후하강,배태발육후기E21myf6 mRNA적표체량시E25적근4배,E25후축점추우평은;E18여E14、E15、E25화E28적표체차이겁현저(P＜0.01),E21여E25、E28적표체야차이겁현저(P＜0.01),여E14、E15적표체차이현저(P＜0.05).재아적흉기화퇴기조직중,전사조mnyf6 mRNA표체량고우대조조중해기인적표체량,차흉기조직체도현저수평(P＜0.05).아myf6기인적표체구유조직특이성,해결과위진일보연구생기조절인자myf6기인결구급기재아배태기기육발육중적작용제공료이론기출.