中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2014年
1期
88-96
,共9页
黄春玲%邓寒%柯雪娥%韩霜雪%何晓阳
黃春玲%鄧寒%柯雪娥%韓霜雪%何曉暘
황춘령%산한%가설아%한상설%하효양
细胞色素P450 CYP2A6%转录水平调控%拟雌激素化合物
細胞色素P450 CYP2A6%轉錄水平調控%擬雌激素化閤物
세포색소P450 CYP2A6%전록수평조공%의자격소화합물
目的 建立尼古丁代谢酶CYP2A6报告基因高容量筛选系统,分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响.方法 构建3种CYP2A6基因转录上游-2460～+1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3UP,GL3-2A6 EP和pGL3-2A6 3EP,分别与雌激素受体α(ERα)及海肾荧光蛋白表达载体三重共转染人肝HepG2细胞.用双荧光素酶报告基因分析技术,选择确认对雌二醇诱导应答最强的CYP2A6报告基因系统;分别用氰戊菊酯、2,2',4,4'-四溴联苯醚、4-二羟基二苯基丙烷、全氟辛酸铵、淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素等7种拟雌激素化合物处理转染报告基因的HepG2细胞,同时设置雌二醇10 nmol·L-1阳性和0.1%DMSO阴性对照,48 h后测定各组细胞相对荧光强度,分析评估拟雌激素物质对CYP2A6基因转录的诱导作用.结果 3种CYP2A6报告基因重组体中pGL3-2A6 3EP对雌二醇诱导应答最强,且呈显著量效依赖关系.7种拟雌激素化合物对CYP2A6报告基因均具显著诱导作用,其中,2,2',4,4'-四溴联苯醚1.0～100.0 nmol·L-1诱导倍变值为1.45±0.13～3.30±0.13(P<0.01),诱导效应最强.表现出相似的量效诱导关系,淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素10 μmol·L-1时的诱导倍变值为2.41～2.83(P<0.01).结论 建立灵敏可靠、重复性强的CYP2A6报告基因高容量筛选系统,证实多种拟雌激素物质通过激活ERα诱导CYP2A6报告基因转录.提示环境拟雌激素污染物和药材食材雌激素样活性物质可诱导个体尼古丁代谢酶基因表达,从而干扰个体尼古丁代谢清除活性及其对环境化合物致癌代谢活化水平.
目的 建立尼古丁代謝酶CYP2A6報告基因高容量篩選繫統,分析環境和天然雌激素樣化閤物對CYP2A6基因轉錄的影響.方法 構建3種CYP2A6基因轉錄上遊-2460～+1全長、增彊子-啟動子串聯和3倍增彊子-啟動子串聯的熒光素酶報告基因重組體pGL3-2A6 3UP,GL3-2A6 EP和pGL3-2A6 3EP,分彆與雌激素受體α(ERα)及海腎熒光蛋白錶達載體三重共轉染人肝HepG2細胞.用雙熒光素酶報告基因分析技術,選擇確認對雌二醇誘導應答最彊的CYP2A6報告基因繫統;分彆用氰戊菊酯、2,2',4,4'-四溴聯苯醚、4-二羥基二苯基丙烷、全氟辛痠銨、淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素等7種擬雌激素化閤物處理轉染報告基因的HepG2細胞,同時設置雌二醇10 nmol·L-1暘性和0.1%DMSO陰性對照,48 h後測定各組細胞相對熒光彊度,分析評估擬雌激素物質對CYP2A6基因轉錄的誘導作用.結果 3種CYP2A6報告基因重組體中pGL3-2A6 3EP對雌二醇誘導應答最彊,且呈顯著量效依賴關繫.7種擬雌激素化閤物對CYP2A6報告基因均具顯著誘導作用,其中,2,2',4,4'-四溴聯苯醚1.0～100.0 nmol·L-1誘導倍變值為1.45±0.13～3.30±0.13(P<0.01),誘導效應最彊.錶現齣相似的量效誘導關繫,淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素10 μmol·L-1時的誘導倍變值為2.41～2.83(P<0.01).結論 建立靈敏可靠、重複性彊的CYP2A6報告基因高容量篩選繫統,證實多種擬雌激素物質通過激活ERα誘導CYP2A6報告基因轉錄.提示環境擬雌激素汙染物和藥材食材雌激素樣活性物質可誘導箇體尼古丁代謝酶基因錶達,從而榦擾箇體尼古丁代謝清除活性及其對環境化閤物緻癌代謝活化水平.
목적 건립니고정대사매CYP2A6보고기인고용량사선계통,분석배경화천연자격소양화합물대CYP2A6기인전록적영향.방법 구건3충CYP2A6기인전록상유-2460～+1전장、증강자-계동자천련화3배증강자-계동자천련적형광소매보고기인중조체pGL3-2A6 3UP,GL3-2A6 EP화pGL3-2A6 3EP,분별여자격소수체α(ERα)급해신형광단백표체재체삼중공전염인간HepG2세포.용쌍형광소매보고기인분석기술,선택학인대자이순유도응답최강적CYP2A6보고기인계통;분별용청무국지、2,2',4,4'-사추련분미、4-이간기이분기병완、전불신산안、음양곽감、대두감원화곡피소등7충의자격소화합물처리전염보고기인적HepG2세포,동시설치자이순10 nmol·L-1양성화0.1%DMSO음성대조,48 h후측정각조세포상대형광강도,분석평고의자격소물질대CYP2A6기인전록적유도작용.결과 3충CYP2A6보고기인중조체중pGL3-2A6 3EP대자이순유도응답최강,차정현저량효의뢰관계.7충의자격소화합물대CYP2A6보고기인균구현저유도작용,기중,2,2',4,4'-사추련분미1.0～100.0 nmol·L-1유도배변치위1.45±0.13～3.30±0.13(P<0.01),유도효응최강.표현출상사적량효유도관계,음양곽감、대두감원화곡피소10 μmol·L-1시적유도배변치위2.41～2.83(P<0.01).결론 건립령민가고、중복성강적CYP2A6보고기인고용량사선계통,증실다충의자격소물질통과격활ERα유도CYP2A6보고기인전록.제시배경의자격소오염물화약재식재자격소양활성물질가유도개체니고정대사매기인표체,종이간우개체니고정대사청제활성급기대배경화합물치암대사활화수평.
