广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2014年
3期
336-339
,共4页
叶丹凤%郑艳华%丁涛%薛士鹏%马红霞
葉丹鳳%鄭豔華%丁濤%薛士鵬%馬紅霞
협단봉%정염화%정도%설사붕%마홍하
c-Fos%RNA干扰%慢病毒%猪卵巢颗粒细胞
c-Fos%RNA榦擾%慢病毒%豬卵巢顆粒細胞
c-Fos%RNA간우%만병독%저란소과립세포
目的 构建慢病毒载体及观察其介导的RNA干扰猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因表达情况.方法 通过在线软件设计猪c-Fos基因shRNA序列,合成、退火形成双寡链核酸后克隆到PGMLV-SC1载体,测序.用构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染293T细胞,包装成4组病毒(shRNA c-Fos1、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos4),并测定滴度.感染猪卵巢颗粒细胞,采用PCR和Western blot检测各组细胞c-Fos mRNA和蛋白表达.结果 重组克隆中插入片段序列与设计的Oligo序列完全一致.滴度为1×108 TU/mL,感染复数30时,阴性对照组、实验shRNA c-Fos4、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos1组c-Fos mRNA的表达分别为对照组的0.842 7±0.065 6、0.797 6±0.073 8、0.694 1±0.048 9、0.653 7±0.047 0、0.312 3±0.010 6倍(P<0.05),c-Fos蛋白的表达下降.结论 实验shRNA c-Fos1组c-Fos基因下调最明显,成功构建猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因慢病毒RNAi表达载体并筛选出最佳siRNA序列.为c-Fos基因的功能研究提供了研究基础.
目的 構建慢病毒載體及觀察其介導的RNA榦擾豬卵巢顆粒細胞c-Fos基因錶達情況.方法 通過在線軟件設計豬c-Fos基因shRNA序列,閤成、退火形成雙寡鏈覈痠後剋隆到PGMLV-SC1載體,測序.用構建的慢病毒錶達載體和包裝質粒共轉染293T細胞,包裝成4組病毒(shRNA c-Fos1、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos4),併測定滴度.感染豬卵巢顆粒細胞,採用PCR和Western blot檢測各組細胞c-Fos mRNA和蛋白錶達.結果 重組剋隆中插入片段序列與設計的Oligo序列完全一緻.滴度為1×108 TU/mL,感染複數30時,陰性對照組、實驗shRNA c-Fos4、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos1組c-Fos mRNA的錶達分彆為對照組的0.842 7±0.065 6、0.797 6±0.073 8、0.694 1±0.048 9、0.653 7±0.047 0、0.312 3±0.010 6倍(P<0.05),c-Fos蛋白的錶達下降.結論 實驗shRNA c-Fos1組c-Fos基因下調最明顯,成功構建豬卵巢顆粒細胞c-Fos基因慢病毒RNAi錶達載體併篩選齣最佳siRNA序列.為c-Fos基因的功能研究提供瞭研究基礎.
목적 구건만병독재체급관찰기개도적RNA간우저란소과립세포c-Fos기인표체정황.방법 통과재선연건설계저c-Fos기인shRNA서렬,합성、퇴화형성쌍과련핵산후극륭도PGMLV-SC1재체,측서.용구건적만병독표체재체화포장질립공전염293T세포,포장성4조병독(shRNA c-Fos1、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos4),병측정적도.감염저란소과립세포,채용PCR화Western blot검측각조세포c-Fos mRNA화단백표체.결과 중조극륭중삽입편단서렬여설계적Oligo서렬완전일치.적도위1×108 TU/mL,감염복수30시,음성대조조、실험shRNA c-Fos4、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos1조c-Fos mRNA적표체분별위대조조적0.842 7±0.065 6、0.797 6±0.073 8、0.694 1±0.048 9、0.653 7±0.047 0、0.312 3±0.010 6배(P<0.05),c-Fos단백적표체하강.결론 실험shRNA c-Fos1조c-Fos기인하조최명현,성공구건저란소과립세포c-Fos기인만병독RNAi표체재체병사선출최가siRNA서렬.위c-Fos기인적공능연구제공료연구기출.
