中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
1期
18-24
,共7页
刘菲菲%徐丽萍%龙大宏%陈艳%张君度%龙静怡
劉菲菲%徐麗萍%龍大宏%陳豔%張君度%龍靜怡
류비비%서려평%룡대굉%진염%장군도%룡정이
神经干细胞%神经球%单层贴壁培养%分化%脑源性神经生长因子
神經榦細胞%神經毬%單層貼壁培養%分化%腦源性神經生長因子
신경간세포%신경구%단층첩벽배양%분화%뇌원성신경생장인자
neural stem cell%neurospheres%adherent monolayer culture%differentiation%brain-derived neurotrophic factor%notch signal pathway
[目的]建立神经干细胞(NSC)体外培养方案,使NSC的体外可以得到增殖和分化,并检测NSC分化过程中HES1和MASH1的表达变化.[方法]无菌条件下取SD大鼠胚胎端脑,无血清悬浮培养,形成P2代神经球后,将神经球消化成单细胞,分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养,并对两种不同培养方式下的NSC进行干性鉴定和分化能力鉴定.用不同浓度(20、40、80 μg/L)的脑源性神经生长因子(BDNF)诱导NSC分化,选出最合适的浓度.用BDNF最佳诱导浓度诱导NSC分化,Q-PCR检测分化过程中HES1和MASH1的表达变化.[结果]神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的NSC;分化3d后,在不加入任何诱导因素的情况下,单层贴壁培养的NSC能更高比例[(19.55±1.09)％]地分化为β-tubulinⅢ阳性细胞；BDNF 40 μg/L能诱导出更多的β-tubulinⅢ阳性细胞[(34.17±0.60)％]；在分化1、3和7d时,Q-OCR结果表明MASH1在BDNF诱导下组较NSC和对照组表达水平明显上升.[结论]单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元,BDNF为40μg/L时能诱导出更高比例的神经元,BDNF可以诱导MASH1在NSC分化过程中表达明显上升.
[目的]建立神經榦細胞(NSC)體外培養方案,使NSC的體外可以得到增殖和分化,併檢測NSC分化過程中HES1和MASH1的錶達變化.[方法]無菌條件下取SD大鼠胚胎耑腦,無血清懸浮培養,形成P2代神經毬後,將神經毬消化成單細胞,分為神經毬懸浮培養和單層貼壁培養,併對兩種不同培養方式下的NSC進行榦性鑒定和分化能力鑒定.用不同濃度(20、40、80 μg/L)的腦源性神經生長因子(BDNF)誘導NSC分化,選齣最閤適的濃度.用BDNF最佳誘導濃度誘導NSC分化,Q-PCR檢測分化過程中HES1和MASH1的錶達變化.[結果]神經毬懸浮培養和單層貼壁培養均可得到的NSC;分化3d後,在不加入任何誘導因素的情況下,單層貼壁培養的NSC能更高比例[(19.55±1.09)％]地分化為β-tubulinⅢ暘性細胞；BDNF 40 μg/L能誘導齣更多的β-tubulinⅢ暘性細胞[(34.17±0.60)％]；在分化1、3和7d時,Q-OCR結果錶明MASH1在BDNF誘導下組較NSC和對照組錶達水平明顯上升.[結論]單層貼壁培養的神經榦細胞更利于分化為神經元,BDNF為40μg/L時能誘導齣更高比例的神經元,BDNF可以誘導MASH1在NSC分化過程中錶達明顯上升.
[목적]건립신경간세포(NSC)체외배양방안,사NSC적체외가이득도증식화분화,병검측NSC분화과정중HES1화MASH1적표체변화.[방법]무균조건하취SD대서배태단뇌,무혈청현부배양,형성P2대신경구후,장신경구소화성단세포,분위신경구현부배양화단층첩벽배양,병대량충불동배양방식하적NSC진행간성감정화분화능력감정.용불동농도(20、40、80 μg/L)적뇌원성신경생장인자(BDNF)유도NSC분화,선출최합괄적농도.용BDNF최가유도농도유도NSC분화,Q-PCR검측분화과정중HES1화MASH1적표체변화.[결과]신경구현부배양화단층첩벽배양균가득도적NSC;분화3d후,재불가입임하유도인소적정황하,단층첩벽배양적NSC능경고비례[(19.55±1.09)％]지분화위β-tubulinⅢ양성세포；BDNF 40 μg/L능유도출경다적β-tubulinⅢ양성세포[(34.17±0.60)％]；재분화1、3화7d시,Q-OCR결과표명MASH1재BDNF유도하조교NSC화대조조표체수평명현상승.[결론]단층첩벽배양적신경간세포경리우분화위신경원,BDNF위40μg/L시능유도출경고비례적신경원,BDNF가이유도MASH1재NSC분화과정중표체명현상승.
