中国酿造
中國釀造
중국양조
CHINA BREWING
2014年
2期
28-31
,共4页
沈玺龙%蔡传斌%王亚娟%卢彪%吴拥军
瀋璽龍%蔡傳斌%王亞娟%盧彪%吳擁軍
침새룡%채전빈%왕아연%로표%오옹군
枯草芽孢杆菌%谷氨酰胺酶%卡那霉素%pKSV7%双交换
枯草芽孢桿菌%穀氨酰胺酶%卡那黴素%pKSV7%雙交換
고초아포간균%곡안선알매%잡나매소%pKSV7%쌍교환
Bacillus subtilis%glutaminase%kanamycin%pKSV7%dual-exchange
为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌.采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilisB J3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂.将同源臂及卡那霉素基因(Kan)克隆入温敏型载体pKSV7,构建了双交换载体pKUKD.并利用pKUKD质粒将kan基因定点整合入BJ3-2染色体上,通过Kan抗性筛选获得glsA敲除菌株BJ-kan.经检测BJ3-2菌株谷氨酰胺酶活力比重组菌株高3.2倍.结果显示:BJ3-2染色体上的基因可通过同源重组方式进行敲除与置换,为今后B J3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除与置换提供了更加便捷的方法.
為瞭構建能穩定錶達外源基因且無抗性標記基因的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)工程菌.採用聚閤酶鏈式反應(PCR)技術,分兩段擴增定位于B.subtilisB J3-2染色體上的穀氨酰胺酶基因(glsA)上下遊基因片段作為同源臂.將同源臂及卡那黴素基因(Kan)剋隆入溫敏型載體pKSV7,構建瞭雙交換載體pKUKD.併利用pKUKD質粒將kan基因定點整閤入BJ3-2染色體上,通過Kan抗性篩選穫得glsA敲除菌株BJ-kan.經檢測BJ3-2菌株穀氨酰胺酶活力比重組菌株高3.2倍.結果顯示:BJ3-2染色體上的基因可通過同源重組方式進行敲除與置換,為今後B J3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除與置換提供瞭更加便捷的方法.
위료구건능은정표체외원기인차무항성표기기인적고초아포간균(Bacillus subtilis)공정균.채용취합매련식반응(PCR)기술,분량단확증정위우B.subtilisB J3-2염색체상적곡안선알매기인(glsA)상하유기인편단작위동원비.장동원비급잡나매소기인(Kan)극륭입온민형재체pKSV7,구건료쌍교환재체pKUKD.병이용pKUKD질립장kan기인정점정합입BJ3-2염색체상,통과Kan항성사선획득glsA고제균주BJ-kan.경검측BJ3-2균주곡안선알매활력비중조균주고3.2배.결과현시:BJ3-2염색체상적기인가통과동원중조방식진행고제여치환,위금후B J3-2균주이급야생형B.subtilis기인고제여치환제공료경가편첩적방법.
