厦门大学学报（自然科学版）
廈門大學學報（自然科學版）
하문대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2014年
1期
126-131
,共6页
高美玲%徐丽美%李钫%杨丰
高美玲%徐麗美%李鈁%楊豐
고미령%서려미%리방%양봉
对虾白斑综合征病毒%VP95%转录分析%多克隆抗体
對蝦白斑綜閤徵病毒%VP95%轉錄分析%多剋隆抗體
대하백반종합정병독%VP95%전록분석%다극륭항체
white spot syndrome virus%VP95%transcriptional analysis%polyclonal antibody
对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是造成养殖对虾病害的主要病原,其300 kb的双链环状DNA基因组共编码532个开放阅读框(open reading frames,ORF).蛋白VP95是WSSV的结构蛋白,在病毒囊膜蛋白和核衣壳中均有分布,由ORFwsv442编码,基因全长2 400 bp.首先对基因vp95的表达时序进行分析,证明该基因属于晚期基因.为了更深入地研究该结构蛋白的功能,选择中间编码200个氨基酸的片段(1 051～1 650 nt)进行克隆表达.此片段被克隆到pET-His载体上,构建好的质粒转化人表达菌株大肠杆菌(Escherichia coli)BL-21 (DE3),经IPTG诱导后,收集细菌,超声破碎后,将含有可溶性表达重组蛋白的上清用Ni2+ NTA agaros纯化.纯化的重组蛋白His-VP95-M200免疫小鼠,制备抗血清.为了去除血清中的杂质,用HiTrap NHS-activated HP (GE Healthcare)亲和层析纯化柱子纯化血清中抗蛋白VP95的抗体.Western blot分析显示,未纯化的血清和纯化的抗体对病毒粒子中蛋白VP95都有很高的效价,并且具有严格的专一性.为进一步研究VP95蛋白在病毒粒子的包装中的作用,以及其在病毒的入侵过程中的功能奠定了良好的基础.
對蝦白斑綜閤徵病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是造成養殖對蝦病害的主要病原,其300 kb的雙鏈環狀DNA基因組共編碼532箇開放閱讀框(open reading frames,ORF).蛋白VP95是WSSV的結構蛋白,在病毒囊膜蛋白和覈衣殼中均有分佈,由ORFwsv442編碼,基因全長2 400 bp.首先對基因vp95的錶達時序進行分析,證明該基因屬于晚期基因.為瞭更深入地研究該結構蛋白的功能,選擇中間編碼200箇氨基痠的片段(1 051～1 650 nt)進行剋隆錶達.此片段被剋隆到pET-His載體上,構建好的質粒轉化人錶達菌株大腸桿菌(Escherichia coli)BL-21 (DE3),經IPTG誘導後,收集細菌,超聲破碎後,將含有可溶性錶達重組蛋白的上清用Ni2+ NTA agaros純化.純化的重組蛋白His-VP95-M200免疫小鼠,製備抗血清.為瞭去除血清中的雜質,用HiTrap NHS-activated HP (GE Healthcare)親和層析純化柱子純化血清中抗蛋白VP95的抗體.Western blot分析顯示,未純化的血清和純化的抗體對病毒粒子中蛋白VP95都有很高的效價,併且具有嚴格的專一性.為進一步研究VP95蛋白在病毒粒子的包裝中的作用,以及其在病毒的入侵過程中的功能奠定瞭良好的基礎.
대하백반종합정병독(white spot syndrome virus,WSSV)시조성양식대하병해적주요병원,기300 kb적쌍련배상DNA기인조공편마532개개방열독광(open reading frames,ORF).단백VP95시WSSV적결구단백,재병독낭막단백화핵의각중균유분포,유ORFwsv442편마,기인전장2 400 bp.수선대기인vp95적표체시서진행분석,증명해기인속우만기기인.위료경심입지연구해결구단백적공능,선택중간편마200개안기산적편단(1 051～1 650 nt)진행극륭표체.차편단피극륭도pET-His재체상,구건호적질립전화인표체균주대장간균(Escherichia coli)BL-21 (DE3),경IPTG유도후,수집세균,초성파쇄후,장함유가용성표체중조단백적상청용Ni2+ NTA agaros순화.순화적중조단백His-VP95-M200면역소서,제비항혈청.위료거제혈청중적잡질,용HiTrap NHS-activated HP (GE Healthcare)친화층석순화주자순화혈청중항단백VP95적항체.Western blot분석현시,미순화적혈청화순화적항체대병독입자중단백VP95도유흔고적효개,병차구유엄격적전일성.위진일보연구VP95단백재병독입자적포장중적작용,이급기재병독적입침과정중적공능전정료량호적기출.
