植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2013年
6期
574-580
,共7页
吴敏亮%张溢溪%兰成忠%刘裴清%李本金%陈庆河%翁启勇
吳敏亮%張溢溪%蘭成忠%劉裴清%李本金%陳慶河%翁啟勇
오민량%장일계%란성충%류배청%리본금%진경하%옹계용
番石榴%葡萄座腔菌%内转录间隔区%环介导等温扩增%钙黄绿素
番石榴%葡萄座腔菌%內轉錄間隔區%環介導等溫擴增%鈣黃綠素
번석류%포도좌강균%내전록간격구%배개도등온확증%개황록소
Psidium guajava%Botryosphaeria rhodina%internal transcribed spacer%loop-mediated isothermal amplification%calcein
以钙黄绿素(calcein)为指示剂,建立了番石榴焦腐病菌(Botryosphaeria rhodina)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可视化快速检测方法.在该方法中,以番石榴焦腐病菌特异的核糖体转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列为目的DNA片段,设计4条引物(2条内引物、2条外引物),优化LAMP反应条件和反应体系,并进行特异性和灵敏度验证.研究确定最佳反应温度为64℃,反应时间1h;特异性检测结果显示,15株不同地理来源的番石榴焦腐病菌和10份番石榴焦腐病病果组织LAMP产物均为阳性(绿色),而26株其它病原菌及10份健康番石榴果实组织LAMP产物均为阴性(橘黄色);灵敏度验证结果显示,该方法的检测灵敏度在DNA水平上可达到10 pg.实验结果表明,快速、准确、灵敏的LAMP检测方法适合基层部门及田间检测番石榴焦腐病菌使用.
以鈣黃綠素(calcein)為指示劑,建立瞭番石榴焦腐病菌(Botryosphaeria rhodina)的環介導等溫擴增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可視化快速檢測方法.在該方法中,以番石榴焦腐病菌特異的覈糖體轉錄間隔區(Internal transcribed spacer,ITS)序列為目的DNA片段,設計4條引物(2條內引物、2條外引物),優化LAMP反應條件和反應體繫,併進行特異性和靈敏度驗證.研究確定最佳反應溫度為64℃,反應時間1h;特異性檢測結果顯示,15株不同地理來源的番石榴焦腐病菌和10份番石榴焦腐病病果組織LAMP產物均為暘性(綠色),而26株其它病原菌及10份健康番石榴果實組織LAMP產物均為陰性(橘黃色);靈敏度驗證結果顯示,該方法的檢測靈敏度在DNA水平上可達到10 pg.實驗結果錶明,快速、準確、靈敏的LAMP檢測方法適閤基層部門及田間檢測番石榴焦腐病菌使用.
이개황록소(calcein)위지시제,건립료번석류초부병균(Botryosphaeria rhodina)적배개도등온확증(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)가시화쾌속검측방법.재해방법중,이번석류초부병균특이적핵당체전록간격구(Internal transcribed spacer,ITS)서렬위목적DNA편단,설계4조인물(2조내인물、2조외인물),우화LAMP반응조건화반응체계,병진행특이성화령민도험증.연구학정최가반응온도위64℃,반응시간1h;특이성검측결과현시,15주불동지리래원적번석류초부병균화10빈번석류초부병병과조직LAMP산물균위양성(록색),이26주기타병원균급10빈건강번석류과실조직LAMP산물균위음성(귤황색);령민도험증결과현시,해방법적검측령민도재DNA수평상가체도10 pg.실험결과표명,쾌속、준학、령민적LAMP검측방법괄합기층부문급전간검측번석류초부병균사용.
