透析与人工器官
透析與人工器官
투석여인공기관
CHINESE JOURNAL OF DIALYSIS AND ARTIFICIAL ORGANS
2013年
1期
8-16
,共9页
徐哲%黄长形%李羽%王平忠%任广立%张岩%刘清泉%连建奇%贾战生
徐哲%黃長形%李羽%王平忠%任廣立%張巖%劉清泉%連建奇%賈戰生
서철%황장형%리우%왕평충%임엄립%장암%류청천%련건기%가전생
TLR4 siRNA%急性肝损伤%小鼠
TLR4 siRNA%急性肝損傷%小鼠
TLR4 siRNA%급성간손상%소서
目的 急性肝功能衰竭是重要的临床综合征.近年来,对急性肝功能衰竭的治疗进展甚微,如何从根本上解决这一难题依然任重道远.方法 本研究基于pSilencer 4.1-CMV neosiRNA表达载体,设计并构建了TLR4 siRNA表达载体.经体外细胞转染实验,筛选了3条抑制效果较好的表达载体,进一步行体内动物实验.进行酶切及测序鉴定,体外评估其对转染RAW264.7细胞TLR4 mRNA、蛋白表达水平的抑制作用,进一步评价了TLR4 siRNA对TNF-α、MIP-2水平的影响,及对LPS诱导的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的作用;之后再采用3条抑制效率较高的TLR4 siRNA进行体内试验,采用尾静脉高压水注射法转染C57BL/6小鼠,静默TLR4的表达,再采用D-Ga lN/LPS联合诱导小鼠急性肝损伤,观察TLR4 siRNA对D-GalN/LPS诱导的肝损伤小鼠是否有保护作用,观察TNF-α、MIP-2水平的变化,观察肝细胞凋亡水平变化.结果 D-GalN/LPS联合给药前48 h及24 h TLR4 siRNA预处理可明显降低ALT及AST的升高幅度,TNF-α及MIP-2的mRNA及细胞因子水平亦被抑制,TUNEL阳性肝细胞百分率下降.TLR4siRNA预处理可明显减轻D-GalN/LPS对C57BL/6小鼠的肝损害作用,降低小鼠的死亡率.通过TLR4 siRNA阻断TLR4表达可能有助于控制LPS炎性反应,防治肝损伤.结论 通过本研究可望进一步阐明LPS/TLR4在急性肝衰竭发病机制中的作用,为今后从RNA角度治疗肝功能衰竭提供理论和实验依据.
目的 急性肝功能衰竭是重要的臨床綜閤徵.近年來,對急性肝功能衰竭的治療進展甚微,如何從根本上解決這一難題依然任重道遠.方法 本研究基于pSilencer 4.1-CMV neosiRNA錶達載體,設計併構建瞭TLR4 siRNA錶達載體.經體外細胞轉染實驗,篩選瞭3條抑製效果較好的錶達載體,進一步行體內動物實驗.進行酶切及測序鑒定,體外評估其對轉染RAW264.7細胞TLR4 mRNA、蛋白錶達水平的抑製作用,進一步評價瞭TLR4 siRNA對TNF-α、MIP-2水平的影響,及對LPS誘導的絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路的作用;之後再採用3條抑製效率較高的TLR4 siRNA進行體內試驗,採用尾靜脈高壓水註射法轉染C57BL/6小鼠,靜默TLR4的錶達,再採用D-Ga lN/LPS聯閤誘導小鼠急性肝損傷,觀察TLR4 siRNA對D-GalN/LPS誘導的肝損傷小鼠是否有保護作用,觀察TNF-α、MIP-2水平的變化,觀察肝細胞凋亡水平變化.結果 D-GalN/LPS聯閤給藥前48 h及24 h TLR4 siRNA預處理可明顯降低ALT及AST的升高幅度,TNF-α及MIP-2的mRNA及細胞因子水平亦被抑製,TUNEL暘性肝細胞百分率下降.TLR4siRNA預處理可明顯減輕D-GalN/LPS對C57BL/6小鼠的肝損害作用,降低小鼠的死亡率.通過TLR4 siRNA阻斷TLR4錶達可能有助于控製LPS炎性反應,防治肝損傷.結論 通過本研究可望進一步闡明LPS/TLR4在急性肝衰竭髮病機製中的作用,為今後從RNA角度治療肝功能衰竭提供理論和實驗依據.
목적 급성간공능쇠갈시중요적림상종합정.근년래,대급성간공능쇠갈적치료진전심미,여하종근본상해결저일난제의연임중도원.방법 본연구기우pSilencer 4.1-CMV neosiRNA표체재체,설계병구건료TLR4 siRNA표체재체.경체외세포전염실험,사선료3조억제효과교호적표체재체,진일보행체내동물실험.진행매절급측서감정,체외평고기대전염RAW264.7세포TLR4 mRNA、단백표체수평적억제작용,진일보평개료TLR4 siRNA대TNF-α、MIP-2수평적영향,급대LPS유도적사렬원활화단백격매(MAPK)신호통로적작용;지후재채용3조억제효솔교고적TLR4 siRNA진행체내시험,채용미정맥고압수주사법전염C57BL/6소서,정묵TLR4적표체,재채용D-Ga lN/LPS연합유도소서급성간손상,관찰TLR4 siRNA대D-GalN/LPS유도적간손상소서시부유보호작용,관찰TNF-α、MIP-2수평적변화,관찰간세포조망수평변화.결과 D-GalN/LPS연합급약전48 h급24 h TLR4 siRNA예처리가명현강저ALT급AST적승고폭도,TNF-α급MIP-2적mRNA급세포인자수평역피억제,TUNEL양성간세포백분솔하강.TLR4siRNA예처리가명현감경D-GalN/LPS대C57BL/6소서적간손해작용,강저소서적사망솔.통과TLR4 siRNA조단TLR4표체가능유조우공제LPS염성반응,방치간손상.결론 통과본연구가망진일보천명LPS/TLR4재급성간쇠갈발병궤제중적작용,위금후종RNA각도치료간공능쇠갈제공이론화실험의거.
