中国糖料
中國糖料
중국당료
SUGAR CROPS OF CHINA
2014年
2期
1-3,9
,共4页
甘蔗黄叶病毒%沉默抑制子%原核表达%抗血清
甘蔗黃葉病毒%沉默抑製子%原覈錶達%抗血清
감자황협병독%침묵억제자%원핵표체%항혈청
根据已发表ScYLV-P0基因系列设计特异性引物,应用RT-PCR技术从甘蔗病叶的mRNA扩增得到目的DNA片段.以pET32a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒pET32a-P0.经过双酶切鉴定和DNA测序后,将重组表达质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)pLySs,在30℃培养条件下IPTG诱导表达.通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况.表达结果显示,在该表达系统中,融合表达蛋白P0是以包涵体形式的蛋白存在;P0融合蛋白大小约45kDa,与P0开放阅读框的理论推算值29.991 kDa加上载体自身蛋白约18 kDa相符,用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白,免疫家兔制备出抗血清,通过酶联法(ID-ELISA)测定本实验制备的ScYLY-P0抗血清工作浓度为1:25000.
根據已髮錶ScYLV-P0基因繫列設計特異性引物,應用RT-PCR技術從甘蔗病葉的mRNA擴增得到目的DNA片段.以pET32a(+)為原覈錶達載體,構建重組錶達質粒pET32a-P0.經過雙酶切鑒定和DNA測序後,將重組錶達質粒轉入大腸桿菌BL21 (DE3)pLySs,在30℃培養條件下IPTG誘導錶達.通過SDS-PAGE電泳檢測融閤蛋白錶達情況.錶達結果顯示,在該錶達繫統中,融閤錶達蛋白P0是以包涵體形式的蛋白存在;P0融閤蛋白大小約45kDa,與P0開放閱讀框的理論推算值29.991 kDa加上載體自身蛋白約18 kDa相符,用Ni2+-NTA瓊脂糖親和層析純化融閤蛋白,免疫傢兔製備齣抗血清,通過酶聯法(ID-ELISA)測定本實驗製備的ScYLY-P0抗血清工作濃度為1:25000.
근거이발표ScYLV-P0기인계렬설계특이성인물,응용RT-PCR기술종감자병협적mRNA확증득도목적DNA편단.이pET32a(+)위원핵표체재체,구건중조표체질립pET32a-P0.경과쌍매절감정화DNA측서후,장중조표체질립전입대장간균BL21 (DE3)pLySs,재30℃배양조건하IPTG유도표체.통과SDS-PAGE전영검측융합단백표체정황.표체결과현시,재해표체계통중,융합표체단백P0시이포함체형식적단백존재;P0융합단백대소약45kDa,여P0개방열독광적이론추산치29.991 kDa가상재체자신단백약18 kDa상부,용Ni2+-NTA경지당친화층석순화융합단백,면역가토제비출항혈청,통과매련법(ID-ELISA)측정본실험제비적ScYLY-P0항혈청공작농도위1:25000.
