新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
2期
333-339
,共7页
韩猛立%黄新%钟发刚%唐思静
韓猛立%黃新%鐘髮剛%唐思靜
한맹립%황신%종발강%당사정
牛病毒性腹泻病毒%实时荧光定量RT-PCR%SYBR Green Ⅰ
牛病毒性腹瀉病毒%實時熒光定量RT-PCR%SYBR Green Ⅰ
우병독성복사병독%실시형광정량RT-PCR%SYBR Green Ⅰ
bovine viral diarrhea virus (BVDV)%real-time quantitative RT-PCR%SYBR Green Ⅰ
[目的]在建立一种快速定量的用于检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的实时荧光定量RT-PCR检测方法.[方法]根据GenBank公布的BVDV 5′端非编码区(5′ UTR)核苷酸序列,软件分析后设计特异性扩增引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法.[结果]建立的方法只能检测到BVDV,而与猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒及牛冠状病毒没有交叉反应,具有高度的特异性;在102～108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.998,最低可检测下限可达到102 copies/μL,具有灵敏度高的特点;不同情况下3次重复实验,变异系数均小于1.5％,具有重复性好的特点.[结果]成功建立了一种用于检测BVDV的实时荧光定量RT-PCR技术,并可用于临床样品的检测,适用于BVDV的快速诊断和流行病学调查.
[目的]在建立一種快速定量的用于檢測牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的實時熒光定量RT-PCR檢測方法.[方法]根據GenBank公佈的BVDV 5′耑非編碼區(5′ UTR)覈苷痠序列,軟件分析後設計特異性擴增引物,建立SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR方法.[結果]建立的方法隻能檢測到BVDV,而與豬瘟病毒、牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛輪狀病毒及牛冠狀病毒沒有交扠反應,具有高度的特異性;在102～108copies/μL模闆範圍內具有良好的線性關繫,所製作的標準麯線相關繫數為0.998,最低可檢測下限可達到102 copies/μL,具有靈敏度高的特點;不同情況下3次重複實驗,變異繫數均小于1.5％,具有重複性好的特點.[結果]成功建立瞭一種用于檢測BVDV的實時熒光定量RT-PCR技術,併可用于臨床樣品的檢測,適用于BVDV的快速診斷和流行病學調查.
[목적]재건립일충쾌속정량적용우검측우병독성복사병독(BVDV)적실시형광정량RT-PCR검측방법.[방법]근거GenBank공포적BVDV 5′단비편마구(5′ UTR)핵감산서렬,연건분석후설계특이성확증인물,건립SYBR GreenⅠ실시형광정량PCR방법.[결과]건립적방법지능검측도BVDV,이여저온병독、우전염성비기관염병독、우륜상병독급우관상병독몰유교차반응,구유고도적특이성;재102～108copies/μL모판범위내구유량호적선성관계,소제작적표준곡선상관계수위0.998,최저가검측하한가체도102 copies/μL,구유령민도고적특점;불동정황하3차중복실험,변이계수균소우1.5％,구유중복성호적특점.[결과]성공건립료일충용우검측BVDV적실시형광정량RT-PCR기술,병가용우림상양품적검측,괄용우BVDV적쾌속진단화류행병학조사.
