中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2014年
3期
503-508
,共6页
闫喆%姚芳%张丽萍%郝军%吴海江%段惠军
閆喆%姚芳%張麗萍%郝軍%吳海江%段惠軍
염철%요방%장려평%학군%오해강%단혜군
糖尿病肾病%上皮-间充质转化%整合素连接激酶%小干扰RNA%糖原合成酶激酶3β%β-连环蛋白
糖尿病腎病%上皮-間充質轉化%整閤素連接激酶%小榦擾RNA%糖原閤成酶激酶3β%β-連環蛋白
당뇨병신병%상피-간충질전화%정합소련접격매%소간우RNA%당원합성매격매3β%β-련배단백
Diabetic nephropathies%Epithelial-mesenchymal transition%Integrin-linked kinase%Small interfering RNA%Glycogen synthase kinase 3β%β-catenin
目的:探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILK siRNA)对糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化和β-连环蛋白(β-catenin)核内表达的影响及意义.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系HKC,分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组 (HG+HK)和高糖+ILK siRNA组(HG+ILK siRNA).倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.RT-PCR及Western blotting检测ILK mRNA及蛋白表达水平;免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin表达.Western blotting检测总GSK-3β、p-GSK-3β、核β-catenin、总β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平.结果:(1)倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,证实构建的siRNA重组质粒成功转染HKC细胞;(2)与HG和 HG+HK组相比,HG+ILK siRNA组ILK mRNA及蛋白水平下降,但较NG组表达仍高;(3)HG+ILK siRNA组ILK基因沉默后,p-GSK-3β与核β-catenin蛋白表达较HG及HG+HK组均下降,但较NG组表达仍高.而总GSK-3β与总β-catenin 在各组表达无明显差异.结论:ILK、GSK-3β和β-catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程.ILK可能通过调节Wnt/β-catenin途径下游效应蛋白GSK-3β和β-catenin的表达而促使肾小管上皮细胞转分化.
目的:探討高糖誘導腎小管上皮細胞轉分化中整閤素連接激酶小榦擾RNA(ILK siRNA)對糖原閤成酶激酶3β(GSK-3β)燐痠化和β-連環蛋白(β-catenin)覈內錶達的影響及意義.方法:體外培養人近耑腎小管上皮細胞繫HKC,分為正常對照組(NG)、高糖組(HG)、高糖+陰性轉染對照組 (HG+HK)和高糖+ILK siRNA組(HG+ILK siRNA).倒置熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白錶達.RT-PCR及Western blotting檢測ILK mRNA及蛋白錶達水平;免疫細胞化學檢測燐痠化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin錶達.Western blotting檢測總GSK-3β、p-GSK-3β、覈β-catenin、總β-catenin、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的錶達水平.結果:(1)倒置熒光顯微鏡下可見綠色熒光蛋白錶達,證實構建的siRNA重組質粒成功轉染HKC細胞;(2)與HG和 HG+HK組相比,HG+ILK siRNA組ILK mRNA及蛋白水平下降,但較NG組錶達仍高;(3)HG+ILK siRNA組ILK基因沉默後,p-GSK-3β與覈β-catenin蛋白錶達較HG及HG+HK組均下降,但較NG組錶達仍高.而總GSK-3β與總β-catenin 在各組錶達無明顯差異.結論:ILK、GSK-3β和β-catenin可能參與瞭高糖介導的腎小管上皮細胞轉分化過程.ILK可能通過調節Wnt/β-catenin途徑下遊效應蛋白GSK-3β和β-catenin的錶達而促使腎小管上皮細胞轉分化.
목적:탐토고당유도신소관상피세포전분화중정합소련접격매소간우RNA(ILK siRNA)대당원합성매격매3β(GSK-3β)린산화화β-련배단백(β-catenin)핵내표체적영향급의의.방법:체외배양인근단신소관상피세포계HKC,분위정상대조조(NG)、고당조(HG)、고당+음성전염대조조 (HG+HK)화고당+ILK siRNA조(HG+ILK siRNA).도치형광현미경하관찰록색형광단백표체.RT-PCR급Western blotting검측ILK mRNA급단백표체수평;면역세포화학검측린산화GSK-3β(p-GSK-3β)화β-catenin표체.Western blotting검측총GSK-3β、p-GSK-3β、핵β-catenin、총β-catenin、E-개점단백(E-cadherin)화α-평활기기동단백(α-SMA)적표체수평.결과:(1)도치형광현미경하가견록색형광단백표체,증실구건적siRNA중조질립성공전염HKC세포;(2)여HG화 HG+HK조상비,HG+ILK siRNA조ILK mRNA급단백수평하강,단교NG조표체잉고;(3)HG+ILK siRNA조ILK기인침묵후,p-GSK-3β여핵β-catenin단백표체교HG급HG+HK조균하강,단교NG조표체잉고.이총GSK-3β여총β-catenin 재각조표체무명현차이.결론:ILK、GSK-3β화β-catenin가능삼여료고당개도적신소관상피세포전분화과정.ILK가능통과조절Wnt/β-catenin도경하유효응단백GSK-3β화β-catenin적표체이촉사신소관상피세포전분화.
