广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
12期
75-81
,共7页
王慕瑾%刘悦%孙超%缪卫国%郑服丛
王慕瑾%劉悅%孫超%繆衛國%鄭服叢
왕모근%류열%손초%무위국%정복총
HpaXm%信号肽类似序列%突变体%互补载体
HpaXm%信號肽類似序列%突變體%互補載體
HpaXm%신호태유사서렬%돌변체%호보재체
为了分析研究Harpin蛋白转运途径,针对来自棉花角斑病菌的HpaXm,构建hpaXm基因突变体和互补载体,根据文献和GenBank中已登录的hpaXm基因全序列及其同源基因hpa1的序列,设计合成多对引物进行PCR扩增,并将扩增片段与载体相连接,用电转化的方式将构建成功的hpaXm基因敲除载体转化Xanthmonas citri subsp.malvacearum,然后测定hpaXm基因突变体在烟草上激发HR的能力.结果得到hpaXm基因上游序列349 bp,hpaXm基因下游序列465 bp;利用重叠PCR将hpaXm基因上下游序列融合,克隆到自杀载体pK18mob的酶切位点BamHI和EcoRI之间,并将pK18mobhpaXm上下游融合片段转化大肠杆菌E.coli DH5α,经卡那霉素平板筛选得到阳性转化子;将hpaXm基因敲除载体转化X.citri subsp.malvacearum,经PCR验证成功敲除hpaXm基因,并发现hpaXm基因突变体在烟草上激发HR的能力要弱于野生型菌株.扩增得到hpaXm基因片段402 bp和信号肽类似序列缺失hpaXm46-402基因片段360 bp,克隆到广宿主载体pHM1的KpnⅠ和SacⅠ酶切位点之间,并将pHM1hpaXm和prHM1 hpaXm46-402转化E.coli DH5α,经壮观霉素平板筛选得到阳性转化子.重组质粒经PCR检测、测序鉴定及突变体在烟草上的表型验证,表明hpaXm基因突变体和互补载体构建成功,为hpaXm基因回复突变株的构建和进一步研究信号肽序列缺失对HpaXm蛋白转运的影响奠定了基础.
為瞭分析研究Harpin蛋白轉運途徑,針對來自棉花角斑病菌的HpaXm,構建hpaXm基因突變體和互補載體,根據文獻和GenBank中已登錄的hpaXm基因全序列及其同源基因hpa1的序列,設計閤成多對引物進行PCR擴增,併將擴增片段與載體相連接,用電轉化的方式將構建成功的hpaXm基因敲除載體轉化Xanthmonas citri subsp.malvacearum,然後測定hpaXm基因突變體在煙草上激髮HR的能力.結果得到hpaXm基因上遊序列349 bp,hpaXm基因下遊序列465 bp;利用重疊PCR將hpaXm基因上下遊序列融閤,剋隆到自殺載體pK18mob的酶切位點BamHI和EcoRI之間,併將pK18mobhpaXm上下遊融閤片段轉化大腸桿菌E.coli DH5α,經卡那黴素平闆篩選得到暘性轉化子;將hpaXm基因敲除載體轉化X.citri subsp.malvacearum,經PCR驗證成功敲除hpaXm基因,併髮現hpaXm基因突變體在煙草上激髮HR的能力要弱于野生型菌株.擴增得到hpaXm基因片段402 bp和信號肽類似序列缺失hpaXm46-402基因片段360 bp,剋隆到廣宿主載體pHM1的KpnⅠ和SacⅠ酶切位點之間,併將pHM1hpaXm和prHM1 hpaXm46-402轉化E.coli DH5α,經壯觀黴素平闆篩選得到暘性轉化子.重組質粒經PCR檢測、測序鑒定及突變體在煙草上的錶型驗證,錶明hpaXm基因突變體和互補載體構建成功,為hpaXm基因迴複突變株的構建和進一步研究信號肽序列缺失對HpaXm蛋白轉運的影響奠定瞭基礎.
위료분석연구Harpin단백전운도경,침대래자면화각반병균적HpaXm,구건hpaXm기인돌변체화호보재체,근거문헌화GenBank중이등록적hpaXm기인전서렬급기동원기인hpa1적서렬,설계합성다대인물진행PCR확증,병장확증편단여재체상련접,용전전화적방식장구건성공적hpaXm기인고제재체전화Xanthmonas citri subsp.malvacearum,연후측정hpaXm기인돌변체재연초상격발HR적능력.결과득도hpaXm기인상유서렬349 bp,hpaXm기인하유서렬465 bp;이용중첩PCR장hpaXm기인상하유서렬융합,극륭도자살재체pK18mob적매절위점BamHI화EcoRI지간,병장pK18mobhpaXm상하유융합편단전화대장간균E.coli DH5α,경잡나매소평판사선득도양성전화자;장hpaXm기인고제재체전화X.citri subsp.malvacearum,경PCR험증성공고제hpaXm기인,병발현hpaXm기인돌변체재연초상격발HR적능력요약우야생형균주.확증득도hpaXm기인편단402 bp화신호태유사서렬결실hpaXm46-402기인편단360 bp,극륭도엄숙주재체pHM1적KpnⅠ화SacⅠ매절위점지간,병장pHM1hpaXm화prHM1 hpaXm46-402전화E.coli DH5α,경장관매소평판사선득도양성전화자.중조질립경PCR검측、측서감정급돌변체재연초상적표형험증,표명hpaXm기인돌변체화호보재체구건성공,위hpaXm기인회복돌변주적구건화진일보연구신호태서렬결실대HpaXm단백전운적영향전정료기출.
