哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2014年
2期
124-127
,共4页
韩乐%高志贤%宁保安%孙志勇
韓樂%高誌賢%寧保安%孫誌勇
한악%고지현%저보안%손지용
李斯特菌%hlyA%原核表达纯化
李斯特菌%hlyA%原覈錶達純化
리사특균%hlyA%원핵표체순화
Listeria monocytogenes%hlyA%prokaryotic expression purification
目的 构建李斯特细菌毒力基因原核表达质粒,并诱导其表达纯化并鉴定目的蛋白.方法 构建李斯特溶血素O(Listeriolysin 0,LLO)的原核表达载体PGEX/3X,并利用Factor Xa切割了GST标签,酶切正确后构建重组原核表达质粒,并转化到大肠杆菌,IPTG诱导目的蛋白表达并进行Western blot鉴定.结果 目的基因经酶切其结果与预期相符,测序结果显示目的基因GenBank登陆的序列完全一致,重组质粒经IPTG诱导表达相对分子量为60 kD的目的蛋白;Western blot鉴定结果显示,重组蛋白能够与抗LM抗体特异性结合.结论 成功构建了重组原核表达质粒,并纯化获得高纯度的LLO蛋白.
目的 構建李斯特細菌毒力基因原覈錶達質粒,併誘導其錶達純化併鑒定目的蛋白.方法 構建李斯特溶血素O(Listeriolysin 0,LLO)的原覈錶達載體PGEX/3X,併利用Factor Xa切割瞭GST標籤,酶切正確後構建重組原覈錶達質粒,併轉化到大腸桿菌,IPTG誘導目的蛋白錶達併進行Western blot鑒定.結果 目的基因經酶切其結果與預期相符,測序結果顯示目的基因GenBank登陸的序列完全一緻,重組質粒經IPTG誘導錶達相對分子量為60 kD的目的蛋白;Western blot鑒定結果顯示,重組蛋白能夠與抗LM抗體特異性結閤.結論 成功構建瞭重組原覈錶達質粒,併純化穫得高純度的LLO蛋白.
목적 구건리사특세균독력기인원핵표체질립,병유도기표체순화병감정목적단백.방법 구건리사특용혈소O(Listeriolysin 0,LLO)적원핵표체재체PGEX/3X,병이용Factor Xa절할료GST표첨,매절정학후구건중조원핵표체질립,병전화도대장간균,IPTG유도목적단백표체병진행Western blot감정.결과 목적기인경매절기결과여예기상부,측서결과현시목적기인GenBank등륙적서렬완전일치,중조질립경IPTG유도표체상대분자량위60 kD적목적단백;Western blot감정결과현시,중조단백능구여항LM항체특이성결합.결론 성공구건료중조원핵표체질립,병순화획득고순도적LLO단백.
