生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
3期
401-405
,共5页
刘晶晶%郭莹莹%李艳琪%王文文%吴祖泽%靳继德
劉晶晶%郭瑩瑩%李豔琪%王文文%吳祖澤%靳繼德
류정정%곽형형%리염기%왕문문%오조택%근계덕
荧光定量PCR%毕赤酵母%DNA残留%重组新蛭素
熒光定量PCR%畢赤酵母%DNA殘留%重組新蛭素
형광정량PCR%필적효모%DNA잔류%중조신질소
real-time PCR%Pichia yeast%residual DNA%recombinant neorudin
目的:建立real-time PCR定量检测毕赤酵母基因组DNA残留量的方法,提高重组新蛭素的产品安全性.方法:选择拷贝数高且分布广泛的毕赤酵母5S rRNA基因为靶标基因设计扩增引物,提取酵母基因组DNA,稀释后作为扩增模板.以罗氏荧光定量PCR_LightCycler480平台为基础,建立基于SYBR Green Ⅰ荧光染料的real-timePCR的检测方法,并考察用该方法检测重组新蛭素中毕赤酵母基因组残留量的灵敏度、精密度和回收率.结果:该法检测宿主DNA残留量灵敏度高,DNA浓度为0.1～ 1000 pg/μL范围内呈现良好的线性关系,其标准曲线的误差值小于0.2;用该法对5批注射用重组新蛭素(酵母)产品中宿主基因组DNA残留量进行了测定,结果分别为0.03、2.3、0.2、0.6、0.2 pg/mg.结论:该方法具有操作简便、灵敏度高等优点,可用于重组产品中酵母基因组残留DNA的定量测定.
目的:建立real-time PCR定量檢測畢赤酵母基因組DNA殘留量的方法,提高重組新蛭素的產品安全性.方法:選擇拷貝數高且分佈廣汎的畢赤酵母5S rRNA基因為靶標基因設計擴增引物,提取酵母基因組DNA,稀釋後作為擴增模闆.以囉氏熒光定量PCR_LightCycler480平檯為基礎,建立基于SYBR Green Ⅰ熒光染料的real-timePCR的檢測方法,併攷察用該方法檢測重組新蛭素中畢赤酵母基因組殘留量的靈敏度、精密度和迴收率.結果:該法檢測宿主DNA殘留量靈敏度高,DNA濃度為0.1～ 1000 pg/μL範圍內呈現良好的線性關繫,其標準麯線的誤差值小于0.2;用該法對5批註射用重組新蛭素(酵母)產品中宿主基因組DNA殘留量進行瞭測定,結果分彆為0.03、2.3、0.2、0.6、0.2 pg/mg.結論:該方法具有操作簡便、靈敏度高等優點,可用于重組產品中酵母基因組殘留DNA的定量測定.
목적:건립real-time PCR정량검측필적효모기인조DNA잔류량적방법,제고중조신질소적산품안전성.방법:선택고패수고차분포엄범적필적효모5S rRNA기인위파표기인설계확증인물,제취효모기인조DNA,희석후작위확증모판.이라씨형광정량PCR_LightCycler480평태위기출,건립기우SYBR Green Ⅰ형광염료적real-timePCR적검측방법,병고찰용해방법검측중조신질소중필적효모기인조잔류량적령민도、정밀도화회수솔.결과:해법검측숙주DNA잔류량령민도고,DNA농도위0.1～ 1000 pg/μL범위내정현량호적선성관계,기표준곡선적오차치소우0.2;용해법대5비주사용중조신질소(효모)산품중숙주기인조DNA잔류량진행료측정,결과분별위0.03、2.3、0.2、0.6、0.2 pg/mg.결론:해방법구유조작간편、령민도고등우점,가용우중조산품중효모기인조잔류DNA적정량측정.
