生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
3期
361-364
,共4页
多顺反子载体%自裂解多肽T2A%牛耳皮肤成纤维细胞
多順反子載體%自裂解多肽T2A%牛耳皮膚成纖維細胞
다순반자재체%자렬해다태T2A%우이피부성섬유세포
multicistronic vector%self-cleaving peptide T2A%bovine fibroblast cell
目的:探讨利用自裂解多肽2A构建的多顺反子载体能否在牛耳皮肤成纤维细胞中实现多基因的有效表达.方法:利用来自一点褐翅蛾病毒(TaV)的2A元件(T2A)将GFP和Neo基因连接到同一载体中,构建pCMV-GFP-T2A-Neo质粒,将其转染牛耳皮肤成纤维细胞,以FACS检测GFP基因的表达,RT-qPCR检测GFP、T2A和Neo的表达.结果:由T2A连接的GFP和Neo基因在mRNA水平上都有显著表达,且表达水平相当.结论:以T2A连接的基因在转入细胞后能正常翻译和表达,显示T2A在牛耳皮肤成纤维细胞中具有自裂解功能,可作为一种构建多顺反子载体的有效工具用于牛耳皮肤成纤维细胞的基因转移,为其将来在转基因牛研制中的应用奠定了基础.
目的:探討利用自裂解多肽2A構建的多順反子載體能否在牛耳皮膚成纖維細胞中實現多基因的有效錶達.方法:利用來自一點褐翅蛾病毒(TaV)的2A元件(T2A)將GFP和Neo基因連接到同一載體中,構建pCMV-GFP-T2A-Neo質粒,將其轉染牛耳皮膚成纖維細胞,以FACS檢測GFP基因的錶達,RT-qPCR檢測GFP、T2A和Neo的錶達.結果:由T2A連接的GFP和Neo基因在mRNA水平上都有顯著錶達,且錶達水平相噹.結論:以T2A連接的基因在轉入細胞後能正常翻譯和錶達,顯示T2A在牛耳皮膚成纖維細胞中具有自裂解功能,可作為一種構建多順反子載體的有效工具用于牛耳皮膚成纖維細胞的基因轉移,為其將來在轉基因牛研製中的應用奠定瞭基礎.
목적:탐토이용자렬해다태2A구건적다순반자재체능부재우이피부성섬유세포중실현다기인적유효표체.방법:이용래자일점갈시아병독(TaV)적2A원건(T2A)장GFP화Neo기인련접도동일재체중,구건pCMV-GFP-T2A-Neo질립,장기전염우이피부성섬유세포,이FACS검측GFP기인적표체,RT-qPCR검측GFP、T2A화Neo적표체.결과:유T2A련접적GFP화Neo기인재mRNA수평상도유현저표체,차표체수평상당.결론:이T2A련접적기인재전입세포후능정상번역화표체,현시T2A재우이피부성섬유세포중구유자렬해공능,가작위일충구건다순반자재체적유효공구용우우이피부성섬유세포적기인전이,위기장래재전기인우연제중적응용전정료기출.
