生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
3期
341-344
,共4页
刁立鹏%王艳春%万秀坤%陶好霞%袁盛凌%杨百亮%刘纯杰
刁立鵬%王豔春%萬秀坤%陶好霞%袁盛凌%楊百亮%劉純傑
조립붕%왕염춘%만수곤%도호하%원성릉%양백량%류순걸
炭疽芽胞杆菌%mntA基因%温敏质粒%同源重组%Cre-LoxP系统
炭疽芽胞桿菌%mntA基因%溫敏質粒%同源重組%Cre-LoxP繫統
탄저아포간균%mntA기인%온민질립%동원중조%Cre-LoxP계통
Bacillus anthracis%mntA gene%thermosensitive plasmid%homologous recombination%Cre-LoxP system
目的:通过同源重组的方法敲除炭疽芽胞杆菌减毒AP422株的mntA基因,使菌株进一步减毒,用于构建新的疫苗候选株.方法:利用PCR方法扩增mntA基因上下游同源臂后与温敏质粒连接,构建打靶载体,并转化炭疽芽胞杆菌减毒AP422株;利用抗生素和温度2种选择压力实现同源重组,敲除目标基因mntA,然后利用Cre-LoxP系统去除抗性筛选标记,得到无抗性标记的缺失突变株,并利用PCR和Western印迹等方法对重组菌进行系统鉴定,最后分析突变株的生物学性状.结果:敲除了AP422株的mntA基因,获得了无抗性标记的缺失突变株,突变株的生存竞争能力比原始菌株明显减弱.结论:突变株获得了进一步减毒,可用于构建新的疫苗候选株.
目的:通過同源重組的方法敲除炭疽芽胞桿菌減毒AP422株的mntA基因,使菌株進一步減毒,用于構建新的疫苗候選株.方法:利用PCR方法擴增mntA基因上下遊同源臂後與溫敏質粒連接,構建打靶載體,併轉化炭疽芽胞桿菌減毒AP422株;利用抗生素和溫度2種選擇壓力實現同源重組,敲除目標基因mntA,然後利用Cre-LoxP繫統去除抗性篩選標記,得到無抗性標記的缺失突變株,併利用PCR和Western印跡等方法對重組菌進行繫統鑒定,最後分析突變株的生物學性狀.結果:敲除瞭AP422株的mntA基因,穫得瞭無抗性標記的缺失突變株,突變株的生存競爭能力比原始菌株明顯減弱.結論:突變株穫得瞭進一步減毒,可用于構建新的疫苗候選株.
목적:통과동원중조적방법고제탄저아포간균감독AP422주적mntA기인,사균주진일보감독,용우구건신적역묘후선주.방법:이용PCR방법확증mntA기인상하유동원비후여온민질립련접,구건타파재체,병전화탄저아포간균감독AP422주;이용항생소화온도2충선택압력실현동원중조,고제목표기인mntA,연후이용Cre-LoxP계통거제항성사선표기,득도무항성표기적결실돌변주,병이용PCR화Western인적등방법대중조균진행계통감정,최후분석돌변주적생물학성상.결과:고제료AP422주적mntA기인,획득료무항성표기적결실돌변주,돌변주적생존경쟁능력비원시균주명현감약.결론:돌변주획득료진일보감독,가용우구건신적역묘후선주.
