生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
3期
328-332
,共5页
李杰%张义全%高鹤%王丽%胡小许%周冬生
李傑%張義全%高鶴%王麗%鬍小許%週鼕生
리걸%장의전%고학%왕려%호소허%주동생
副溶血弧菌%5'-cDNA末端快速扩增%转录起始位点
副溶血弧菌%5'-cDNA末耑快速擴增%轉錄起始位點
부용혈호균%5'-cDNA말단쾌속확증%전록기시위점
Vibrio parahaemolyticus%5'-rapid-amplification of cDNA ends%transcription start site
目的:优化5'-cDNA末端快速扩增(5’-RACE)实验平台,用于定位副溶血弧菌(VP)基因的转录起始位点.方法:提取VP的总RNA,用rDNase Ⅰ消化去除可能污染的基因组DNA;利用T4RNA连接酶将已知序列的寡核苷酸片段连接至RNA的5’端,进而将其逆转录成cDNA;以cDNA为模板,采用巢式PCR技术扩增目的基因DNA片段,并将其直接克隆入T载体;最后通过测序比对的方法确定靶基因的转录起始位点.利用引物延伸实验进一步研究VPA1027的转录起始位点,以检验5’-RACE实验结果的可靠性.结果:5’-RACE实验结果表明,VPA1027、scrG、scrA、cpsA及VPA0198的转录起始位点分别为G(-103)、G(-70)、T(-205)、C(-129)和G(-238)(翻译起始位点为+1);引物延伸结果显示,VPA1027的转录起始位点也为G(-103).结论:优化后的5'-RACE实验可以精确定位VP基因的转录起始位点.
目的:優化5'-cDNA末耑快速擴增(5’-RACE)實驗平檯,用于定位副溶血弧菌(VP)基因的轉錄起始位點.方法:提取VP的總RNA,用rDNase Ⅰ消化去除可能汙染的基因組DNA;利用T4RNA連接酶將已知序列的寡覈苷痠片段連接至RNA的5’耑,進而將其逆轉錄成cDNA;以cDNA為模闆,採用巢式PCR技術擴增目的基因DNA片段,併將其直接剋隆入T載體;最後通過測序比對的方法確定靶基因的轉錄起始位點.利用引物延伸實驗進一步研究VPA1027的轉錄起始位點,以檢驗5’-RACE實驗結果的可靠性.結果:5’-RACE實驗結果錶明,VPA1027、scrG、scrA、cpsA及VPA0198的轉錄起始位點分彆為G(-103)、G(-70)、T(-205)、C(-129)和G(-238)(翻譯起始位點為+1);引物延伸結果顯示,VPA1027的轉錄起始位點也為G(-103).結論:優化後的5'-RACE實驗可以精確定位VP基因的轉錄起始位點.
목적:우화5'-cDNA말단쾌속확증(5’-RACE)실험평태,용우정위부용혈호균(VP)기인적전록기시위점.방법:제취VP적총RNA,용rDNase Ⅰ소화거제가능오염적기인조DNA;이용T4RNA련접매장이지서렬적과핵감산편단련접지RNA적5’단,진이장기역전록성cDNA;이cDNA위모판,채용소식PCR기술확증목적기인DNA편단,병장기직접극륭입T재체;최후통과측서비대적방법학정파기인적전록기시위점.이용인물연신실험진일보연구VPA1027적전록기시위점,이검험5’-RACE실험결과적가고성.결과:5’-RACE실험결과표명,VPA1027、scrG、scrA、cpsA급VPA0198적전록기시위점분별위G(-103)、G(-70)、T(-205)、C(-129)화G(-238)(번역기시위점위+1);인물연신결과현시,VPA1027적전록기시위점야위G(-103).결론:우화후적5'-RACE실험가이정학정위VP기인적전록기시위점.
