生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
3期
323-327
,共5页
朱羿龙%李昌%刘存霞%杜寿文%王茂鹏%叶飞%谭鹏%邢彬%刘继
硃羿龍%李昌%劉存霞%杜壽文%王茂鵬%葉飛%譚鵬%邢彬%劉繼
주예룡%리창%류존하%두수문%왕무붕%협비%담붕%형빈%류계
重组鸡痘病毒%Env蛋白%猴免疫缺陷病毒%遗传稳定性
重組鷄痘病毒%Env蛋白%猴免疫缺陷病毒%遺傳穩定性
중조계두병독%Env단백%후면역결함병독%유전은정성
recombinant fowlpox virus%Env protein%simian immunodeficiency virus%genetic stability
目的:构建并筛选表达猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重组鸡痘病毒(FPV),并对其进行鉴定.方法:设计引物,通过PCR技术扩增SIV env基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的FPV穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-SIV env,然后将其与FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR、RT-PCR、Western印迹对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析.结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组FPV基因组中,RT-PCR、Western印迹结果表明SIV Env蛋白在感染细胞内表达且具有抗原性;连续传代20次,PCR、RT-PCR、Western印迹均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,且病毒已经纯化.结论:获得表达SIV Env蛋白的重组FPV,为进一步免疫试验研究奠定了基础.
目的:構建併篩選錶達猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重組鷄痘病毒(FPV),併對其進行鑒定.方法:設計引物,通過PCR技術擴增SIV env基因,將其連接到pMD18-T載體上,測序正確後將其剋隆入本實驗室自行構建的FPV穿梭載體pTKET中,穫得重組質粒pTKET-SIV env,然後將其與FPV282E4株共轉染原代鷄胚成纖維細胞進行同源重組,以增彊型綠色熒光蛋白為篩選標記,通過噬斑篩選穫得重組病毒,應用PCR、RT-PCR、Western印跡對重組病毒進行鑒定和遺傳穩定性分析.結果:通過10次噬斑篩選,PCR檢測錶明目的基因已整閤到重組FPV基因組中,RT-PCR、Western印跡結果錶明SIV Env蛋白在感染細胞內錶達且具有抗原性;連續傳代20次,PCR、RT-PCR、Western印跡均能檢測到外源基因的整閤、轉錄和錶達,且未能擴增齣FPV-TK基因,錶明重組病毒遺傳穩定性良好,且病毒已經純化.結論:穫得錶達SIV Env蛋白的重組FPV,為進一步免疫試驗研究奠定瞭基礎.
목적:구건병사선표체후면역결함병독(SIV)Env단백적중조계두병독(FPV),병대기진행감정.방법:설계인물,통과PCR기술확증SIV env기인,장기련접도pMD18-T재체상,측서정학후장기극륭입본실험실자행구건적FPV천사재체pTKET중,획득중조질립pTKET-SIV env,연후장기여FPV282E4주공전염원대계배성섬유세포진행동원중조,이증강형록색형광단백위사선표기,통과서반사선획득중조병독,응용PCR、RT-PCR、Western인적대중조병독진행감정화유전은정성분석.결과:통과10차서반사선,PCR검측표명목적기인이정합도중조FPV기인조중,RT-PCR、Western인적결과표명SIV Env단백재감염세포내표체차구유항원성;련속전대20차,PCR、RT-PCR、Western인적균능검측도외원기인적정합、전록화표체,차미능확증출FPV-TK기인,표명중조병독유전은정성량호,차병독이경순화.결론:획득표체SIV Env단백적중조FPV,위진일보면역시험연구전정료기출.
