CAJ | 학술논문

目的：构建针对胰岛素生长因子结合蛋白-2（IGFBP-2）的小干扰RNA（siRNA）表达载体，研究载体介导的RNAi技术对人 U251脑胶质瘤细胞株中IGFBP-2表达的抑制作用。方法根据GenBank提供的IGFBP-2基因（NM-000597）核苷酸序列及siRNA的设计原则，设计合成4对带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列，筛选得到576～594 nt、908～926 nt、938～956 nt 3个19 bp片段靶序列，同时随机组合出一条无关序列，应用限制性内切酶酶切和测序技术鉴定重组克隆。用脂质体介导转染人U251胶质瘤细胞株，采用RT-PCR和Western印迹方法检测细胞IGFBP-2 mRNA和蛋白表达。结果酶切筛选得到4个目的片段的阳性克隆，测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。 RT-PCR和Western印迹检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低U251细胞中IGFBP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建载体介导的IGFBP-2靶向 RNA干扰重组体，并能有效抑制U251细胞中IGFBP-2基因的表达。
목적：구건침대이도소생장인자결합단백-2（IGFBP-2）적소간우RNA（siRNA）표체재체，연구재체개도적RNAi기술대인 U251뇌효질류세포주중IGFBP-2표체적억제작용。방법근거GenBank제공적IGFBP-2기인（NM-000597）핵감산서렬급siRNA적설계원칙，설계합성4대대유BamHⅠ、HindⅢ매절위점적발협결구과핵감산서렬，사선득도576～594 nt、908～926 nt、938～956 nt 3개19 bp편단파서렬，동시수궤조합출일조무관서렬，응용한제성내절매매절화측서기술감정중조극륭。용지질체개도전염인U251효질류세포주，채용RT-PCR화Western인적방법검측세포IGFBP-2 mRNA화단백표체。결과매절사선득도4개목적편단적양성극륭，측서증실중조표체재체중삽입서렬여설계일치。 RT-PCR화Western인적검측현시구건적siRNA표체재체가현저강저U251세포중IGFBP-2 mRNA화단백표체수평。결론성공구건재체개도적IGFBP-2파향 RNA간우중조체，병능유효억제U251세포중IGFBP-2기인적표체。