基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2014年
4期
494-498
,共5页
刘玥%帅春%尹虹%宋艳斌%马文丽
劉玥%帥春%尹虹%宋豔斌%馬文麗
류모%수춘%윤홍%송염빈%마문려
miR-30a%慢病毒表达载体%载体构建
miR-30a%慢病毒錶達載體%載體構建
miR-30a%만병독표체재체%재체구건
miR-30a%lentiviral vector%vector construction
目的 构建携带miR-30a的慢病毒表达载体,为研究miR-30a在慢性粒细胞白血病中的作用机制及对伊马替尼耐药性的影响奠定基础.方法 提取人骨髓细胞基因组DNA,扩增miR-30a的前体序列,克隆到plVTHM慢病毒表达载体上,测序鉴定.重组载体进行病毒包装,感染K562细胞,测定病毒滴度.感染的K562细胞用流式细胞仪分选带有绿色荧光的GFP阳性的细胞,对分选的细胞用实时荧光定量PCR法检测miR-30a在细胞内的表达水平.最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况.结果 重组慢病毒表达载体测序完全正确;病毒滴度检测为6×106 TU/mL;选用160 μL病毒液/1 mL培养基感染K562细胞;感染的K562细胞中miR-30a的表达水平显著增强(P＜0.05);过表达miR-30a后K562细胞增殖水平显著下降(P＜0.05).结论 成功构建了miR-30a慢病毒表达载体,并可在K562细胞中稳定表达,且miR-30a有抑制K562细胞增殖的作用.
目的 構建攜帶miR-30a的慢病毒錶達載體,為研究miR-30a在慢性粒細胞白血病中的作用機製及對伊馬替尼耐藥性的影響奠定基礎.方法 提取人骨髓細胞基因組DNA,擴增miR-30a的前體序列,剋隆到plVTHM慢病毒錶達載體上,測序鑒定.重組載體進行病毒包裝,感染K562細胞,測定病毒滴度.感染的K562細胞用流式細胞儀分選帶有綠色熒光的GFP暘性的細胞,對分選的細胞用實時熒光定量PCR法檢測miR-30a在細胞內的錶達水平.最後用CCK-8法檢測各組細胞的增殖情況.結果 重組慢病毒錶達載體測序完全正確;病毒滴度檢測為6×106 TU/mL;選用160 μL病毒液/1 mL培養基感染K562細胞;感染的K562細胞中miR-30a的錶達水平顯著增彊(P＜0.05);過錶達miR-30a後K562細胞增殖水平顯著下降(P＜0.05).結論 成功構建瞭miR-30a慢病毒錶達載體,併可在K562細胞中穩定錶達,且miR-30a有抑製K562細胞增殖的作用.
목적 구건휴대miR-30a적만병독표체재체,위연구miR-30a재만성립세포백혈병중적작용궤제급대이마체니내약성적영향전정기출.방법 제취인골수세포기인조DNA,확증miR-30a적전체서렬,극륭도plVTHM만병독표체재체상,측서감정.중조재체진행병독포장,감염K562세포,측정병독적도.감염적K562세포용류식세포의분선대유록색형광적GFP양성적세포,대분선적세포용실시형광정량PCR법검측miR-30a재세포내적표체수평.최후용CCK-8법검측각조세포적증식정황.결과 중조만병독표체재체측서완전정학;병독적도검측위6×106 TU/mL;선용160 μL병독액/1 mL배양기감염K562세포;감염적K562세포중miR-30a적표체수평현저증강(P＜0.05);과표체miR-30a후K562세포증식수평현저하강(P＜0.05).결론 성공구건료miR-30a만병독표체재체,병가재K562세포중은정표체,차miR-30a유억제K562세포증식적작용.
