浙江农林大学学报
浙江農林大學學報
절강농림대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG FORESTRY COLLEGE
2014年
4期
515-520
,共6页
张凤雪%徐英武%张智俊%肖冬长%王超莉%屈亚平
張鳳雪%徐英武%張智俊%肖鼕長%王超莉%屈亞平
장봉설%서영무%장지준%초동장%왕초리%굴아평
林木育种学%毛竹%脱氧辛糖酸-8-磷酸合酶%组织特异性表达%原核表达%蛋白纯化%结晶
林木育種學%毛竹%脫氧辛糖痠-8-燐痠閤酶%組織特異性錶達%原覈錶達%蛋白純化%結晶
림목육충학%모죽%탈양신당산-8-린산합매%조직특이성표체%원핵표체%단백순화%결정
forest tree breeding%Phyllostachys edulis%3-deoxy-D-manno-octulosonate (KD0)8-phosphate synthase (KDO8PS)%tissue-specific expression%prokaryotic expression%protein crystallization%crystal
3-deoxy-D-manno-octulosonate (KDO) 8-phosphate synthase (KDO8PS)[EC 4.1.2.16]是KDO生物合成途径中的关键酶.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以毛竹Phyllostachys edulis新鲜实生苗为材料,分离得到竹子KDO8PS基因.通过对不同物种来源的KDO8PS进行氨基酸序列比对分析和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析.将PeKDO8PS基因构建入原核表达载体pET-28a,并在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KDO8PS的可溶性高表达.经nickel亲和层析和分子筛纯化2种方法对表达蛋白进行纯化.结果分析表明:该基因编码区全长876 bp,可编码291个氨基酸.PeKDO8PS与拟南芥Arabidopsis thaliana等植物来源的KDSA2的基因有很高序列一致性,而与微生物来源的KDO8PS序列一致性较低.分析毛竹各组织中KDO8PS基因的表达结果表明,该基因在根、茎和叶片中均有表达,但在根中相对表达量较高,此表达模式亦同拟南芥A tKDSA2类似.另外,发现KDO8PS在溶液(30 mmol·L-1Tris-HCl pH 8.0,200 mmol·L-1氯化钠)中以二聚体的形式存在,并且初步筛选出该酶晶体生长条件.此结果为PeKDO8PS蛋白的最终结构分析奠定了基础.
3-deoxy-D-manno-octulosonate (KDO) 8-phosphate synthase (KDO8PS)[EC 4.1.2.16]是KDO生物閤成途徑中的關鍵酶.採用逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)方法,以毛竹Phyllostachys edulis新鮮實生苗為材料,分離得到竹子KDO8PS基因.通過對不同物種來源的KDO8PS進行氨基痠序列比對分析和半定量RT-PCR技術對該基因進行組織特異性錶達分析.將PeKDO8PS基因構建入原覈錶達載體pET-28a,併在大腸埃希菌Escherichia coli原覈錶達繫統中穫得瞭KDO8PS的可溶性高錶達.經nickel親和層析和分子篩純化2種方法對錶達蛋白進行純化.結果分析錶明:該基因編碼區全長876 bp,可編碼291箇氨基痠.PeKDO8PS與擬南芥Arabidopsis thaliana等植物來源的KDSA2的基因有很高序列一緻性,而與微生物來源的KDO8PS序列一緻性較低.分析毛竹各組織中KDO8PS基因的錶達結果錶明,該基因在根、莖和葉片中均有錶達,但在根中相對錶達量較高,此錶達模式亦同擬南芥A tKDSA2類似.另外,髮現KDO8PS在溶液(30 mmol·L-1Tris-HCl pH 8.0,200 mmol·L-1氯化鈉)中以二聚體的形式存在,併且初步篩選齣該酶晶體生長條件.此結果為PeKDO8PS蛋白的最終結構分析奠定瞭基礎.
3-deoxy-D-manno-octulosonate (KDO) 8-phosphate synthase (KDO8PS)[EC 4.1.2.16]시KDO생물합성도경중적관건매.채용역전록취합매련식반응(RT-PCR)방법,이모죽Phyllostachys edulis신선실생묘위재료,분리득도죽자KDO8PS기인.통과대불동물충래원적KDO8PS진행안기산서렬비대분석화반정량RT-PCR기술대해기인진행조직특이성표체분석.장PeKDO8PS기인구건입원핵표체재체pET-28a,병재대장애희균Escherichia coli원핵표체계통중획득료KDO8PS적가용성고표체.경nickel친화층석화분자사순화2충방법대표체단백진행순화.결과분석표명:해기인편마구전장876 bp,가편마291개안기산.PeKDO8PS여의남개Arabidopsis thaliana등식물래원적KDSA2적기인유흔고서렬일치성,이여미생물래원적KDO8PS서렬일치성교저.분석모죽각조직중KDO8PS기인적표체결과표명,해기인재근、경화협편중균유표체,단재근중상대표체량교고,차표체모식역동의남개A tKDSA2유사.령외,발현KDO8PS재용액(30 mmol·L-1Tris-HCl pH 8.0,200 mmol·L-1록화납)중이이취체적형식존재,병차초보사선출해매정체생장조건.차결과위PeKDO8PS단백적최종결구분석전정료기출.
