激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2014年
2期
110-115
,共6页
谢颖颖%汤冬娥%刘小会%高学娟%刘朗夏
謝穎穎%湯鼕娥%劉小會%高學娟%劉朗夏
사영영%탕동아%류소회%고학연%류랑하
PCNA%表达%DNA损伤%UV%MMS
PCNA%錶達%DNA損傷%UV%MMS
PCNA%표체%DNA손상%UV%MMS
PCNA%expression%DNA damage%UV%MMS
目的:建立DNA损伤的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况.方法:UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化,以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化.运用ShRNA干扰技术降低泛素E3连接酶RAD18和CUL4A的表达,检测内源PCNA蛋白表达水平的变化.结果与结论:UV照射和MMS处理细胞后,细胞形态发生变化,随着时间的延长,大部分细胞趋于死亡.实时荧光定量PCR的结果发现PCNA的mRNA水平下降,但是PCNA蛋白水平的表达无明显变化,说明DNA损伤时PCNA蛋白的稳定性增加,暗示细胞中存在着一定的机制,维持PC-NA蛋白表达量的稳定.干扰E3连接酶CUL4A和RAD18的表达时,PCNA蛋白水平有所升高,提示二者参与了PCNA的降解过程.
目的:建立DNA損傷的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的錶達變化情況.方法:UV照射和MMS處理細胞後利用Western blot和實時熒光定量PCR檢測PCNA蛋白錶達水平和mRNA水平的變化,以及利用倒置熒光顯微鏡觀察細胞的形態變化.運用ShRNA榦擾技術降低汎素E3連接酶RAD18和CUL4A的錶達,檢測內源PCNA蛋白錶達水平的變化.結果與結論:UV照射和MMS處理細胞後,細胞形態髮生變化,隨著時間的延長,大部分細胞趨于死亡.實時熒光定量PCR的結果髮現PCNA的mRNA水平下降,但是PCNA蛋白水平的錶達無明顯變化,說明DNA損傷時PCNA蛋白的穩定性增加,暗示細胞中存在著一定的機製,維持PC-NA蛋白錶達量的穩定.榦擾E3連接酶CUL4A和RAD18的錶達時,PCNA蛋白水平有所升高,提示二者參與瞭PCNA的降解過程.
목적:건립DNA손상적모형,재단백수평화mRNA수평연구PCNA적표체변화정황.방법:UV조사화MMS처리세포후이용Western blot화실시형광정량PCR검측PCNA단백표체수평화mRNA수평적변화,이급이용도치형광현미경관찰세포적형태변화.운용ShRNA간우기술강저범소E3련접매RAD18화CUL4A적표체,검측내원PCNA단백표체수평적변화.결과여결론:UV조사화MMS처리세포후,세포형태발생변화,수착시간적연장,대부분세포추우사망.실시형광정량PCR적결과발현PCNA적mRNA수평하강,단시PCNA단백수평적표체무명현변화,설명DNA손상시PCNA단백적은정성증가,암시세포중존재착일정적궤제,유지PC-NA단백표체량적은정.간우E3련접매CUL4A화RAD18적표체시,PCNA단백수평유소승고,제시이자삼여료PCNA적강해과정.
