西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2014年
6期
1075-1082
,共8页
林丽霞%屈莹%徐洋%林玉玲%赖钟雄
林麗霞%屈瑩%徐洋%林玉玲%賴鐘雄
림려하%굴형%서양%림옥령%뢰종웅
龙眼%体细胞胚胎发生%生长素响应因子%生物信息学%实时荧光定量PCR%亚细胞定位
龍眼%體細胞胚胎髮生%生長素響應因子%生物信息學%實時熒光定量PCR%亞細胞定位
용안%체세포배태발생%생장소향응인자%생물신식학%실시형광정량PCR%아세포정위
Dimocarpus longan Lour.%somatic embryogenesis%auxin response factor%bioinformatics%real-time reverse transcription PCR%subcellular localization
以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR和RACE技术克隆获得生长素响应因子ARF5acDNA全长序列,利用实时荧光定量法检测其在龙眼体胚不同发育时期的转录水平,并将其与绿色荧光蛋白(GFP)构建成亚细胞定位载体侵染洋葱表皮细胞.结果表明:龙眼ARF5a(命名为DlARF5a,GenBank登录号为KF739401)的cDNA序列全长为3 322 bp,其中开放阅读框为2 829 bp,212 bp 5'非编码区,258 bp 3 '非编码区,编码942个氨基酸.生物信息学预测显示,DlARF5a编码蛋白具有B3、Auxin-resp和AUX-IAA保守区与结构功能域,中间区域富含谷甘氨酸、丝氨酸和亮氨酸,是一个定位于细胞质的具有促进转录活性功能的水溶性蛋白.系统进化树分析表明,该基因编码的氨基酸序列与大豆的亲缘关系最近.qRT-PCR检测显示,DlARF5a在龙眼球形胚和鱼雷形胚时期表达显著增强,而在6个发育阶段中子叶形胚的表达量最低,推测DlARF5a参与龙眼体胚中鱼雷胚时期的形态建成.共聚焦显微镜观察结果显示,未添加外源生长素IAA的DlARF5a蛋白定位于细胞质中,而经外源生长素处理的DlARF5a蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核中均有表达,推测龙眼生长素响应蛋白DlARF5a能够响应外源生长素IAA而改变其在细胞中的空间位置.
以龍眼鬆散型胚性愈傷組織為材料,採用RT-PCR和RACE技術剋隆穫得生長素響應因子ARF5acDNA全長序列,利用實時熒光定量法檢測其在龍眼體胚不同髮育時期的轉錄水平,併將其與綠色熒光蛋白(GFP)構建成亞細胞定位載體侵染洋蔥錶皮細胞.結果錶明:龍眼ARF5a(命名為DlARF5a,GenBank登錄號為KF739401)的cDNA序列全長為3 322 bp,其中開放閱讀框為2 829 bp,212 bp 5'非編碼區,258 bp 3 '非編碼區,編碼942箇氨基痠.生物信息學預測顯示,DlARF5a編碼蛋白具有B3、Auxin-resp和AUX-IAA保守區與結構功能域,中間區域富含穀甘氨痠、絲氨痠和亮氨痠,是一箇定位于細胞質的具有促進轉錄活性功能的水溶性蛋白.繫統進化樹分析錶明,該基因編碼的氨基痠序列與大豆的親緣關繫最近.qRT-PCR檢測顯示,DlARF5a在龍眼毬形胚和魚雷形胚時期錶達顯著增彊,而在6箇髮育階段中子葉形胚的錶達量最低,推測DlARF5a參與龍眼體胚中魚雷胚時期的形態建成.共聚焦顯微鏡觀察結果顯示,未添加外源生長素IAA的DlARF5a蛋白定位于細胞質中,而經外源生長素處理的DlARF5a蛋白在細胞膜、細胞質和細胞覈中均有錶達,推測龍眼生長素響應蛋白DlARF5a能夠響應外源生長素IAA而改變其在細胞中的空間位置.
이용안송산형배성유상조직위재료,채용RT-PCR화RACE기술극륭획득생장소향응인자ARF5acDNA전장서렬,이용실시형광정량법검측기재용안체배불동발육시기적전록수평,병장기여록색형광단백(GFP)구건성아세포정위재체침염양총표피세포.결과표명:용안ARF5a(명명위DlARF5a,GenBank등록호위KF739401)적cDNA서렬전장위3 322 bp,기중개방열독광위2 829 bp,212 bp 5'비편마구,258 bp 3 '비편마구,편마942개안기산.생물신식학예측현시,DlARF5a편마단백구유B3、Auxin-resp화AUX-IAA보수구여결구공능역,중간구역부함곡감안산、사안산화량안산,시일개정위우세포질적구유촉진전록활성공능적수용성단백.계통진화수분석표명,해기인편마적안기산서렬여대두적친연관계최근.qRT-PCR검측현시,DlARF5a재용안구형배화어뢰형배시기표체현저증강,이재6개발육계단중자협형배적표체량최저,추측DlARF5a삼여용안체배중어뢰배시기적형태건성.공취초현미경관찰결과현시,미첨가외원생장소IAA적DlARF5a단백정위우세포질중,이경외원생장소처리적DlARF5a단백재세포막、세포질화세포핵중균유표체,추측용안생장소향응단백DlARF5a능구향응외원생장소IAA이개변기재세포중적공간위치.
