CAJ | 학술논문

为研究SPT和HEC及其相互作用对甘蓝雌蕊发育的影响,以结球甘蓝自交不亲和系E1为材料,提取雌蕊总RNA,根据拟南芥中SPT和HEC1基因设计引物,采用同源克隆方法克隆SPT基因,其序列1085 bp,开放阅读框(ORF) 1062 bp; HEC1基因ORF 696 bp.通过cDNA推导得到的氨基酸序列表明,SPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67kD,pI为6.83; HEC1编码231个氨基酸残基,预测分子量为25.26 kD,pI为10.2.两基因在各器官中均表达,但SPT在果实和雌蕊中表达量最高,而HEC1在根和花蕾中的表达量最高.为检测两者的相互作用,构建原核表达质粒pCold I-SPT和pGEX-HEC1,pull-down试验表明两蛋白能够在体外相互作用.同时构建pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1及互换载体pGBKT7-HEC1和pGADT7-SPT酵母表达载体,分别转化酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后均未出现自激活和毒性现象,融合后的二倍体酵母均能在S D/-Trp-Leu-Ade-His/X-t-gal/AbA板上长出蓝色菌斑,表明SPT和HEC1能够相互作用激活下游的HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2报告基因,酵母双杂交试验结果与Pull-down检测一致,说明SPT和HEC1能够相互作用以调控雌蕊的发育.
위연구SPT화HEC급기상호작용대감람자예발육적영향,이결구감람자교불친화계E1위재료,제취자예총RNA,근거의남개중SPT화HEC1기인설계인물,채용동원극륭방법극륭SPT기인,기서렬1085 bp,개방열독광(ORF) 1062 bp; HEC1기인ORF 696 bp.통과cDNA추도득도적안기산서렬표명,SPT편마353개안기산잔기,예측분자량위37.67kD,pI위6.83; HEC1편마231개안기산잔기,예측분자량위25.26 kD,pI위10.2.량기인재각기관중균표체,단SPT재과실화자예중표체량최고,이HEC1재근화화뢰중적표체량최고.위검측량자적상호작용,구건원핵표체질립pCold I-SPT화pGEX-HEC1,pull-down시험표명량단백능구재체외상호작용.동시구건pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1급호환재체pGBKT7-HEC1화pGADT7-SPT효모표체재체,분별전화효모Y2HGold화Y187감수태세포후균미출현자격활화독성현상,융합후적이배체효모균능재S D/-Trp-Leu-Ade-His/X-t-gal/AbA판상장출람색균반,표명SPT화HEC1능구상호작용격활하유적HIS3、AUR1-C、MEL1화ADE2보고기인,효모쌍잡교시험결과여Pull-down검측일치,설명SPT화HEC1능구상호작용이조공자예적발육.