微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2014年
3期
174-181
,共8页
韩海燕%王小飞%武有聪%许涛%刘华勇%蔡霞%瞿涤
韓海燕%王小飛%武有聰%許濤%劉華勇%蔡霞%瞿滌
한해연%왕소비%무유총%허도%류화용%채하%구조
表皮葡萄球菌%phoU同源基因%原核表达%持留菌
錶皮葡萄毬菌%phoU同源基因%原覈錶達%持留菌
표피포도구균%phoU동원기인%원핵표체%지류균
Staphylococcus epidermidis%phoU homologue%Prokaryotic expression%Persister
表皮葡萄球菌可在植入性医疗材料表面形成生物膜,对多种抗生素耐受,而持留菌的形成是导致细菌生物膜耐药的原因之一.研究发现,大肠埃希菌中PhoU可影响持留菌的形成,与细菌对多种抗生素及压力条件的耐受相关,但表皮葡萄球菌中PhoU的功能仍不清楚.生物信息学分析显示,在表皮葡萄球菌中存在2个phoU同源基因,其中serp0956位于pst操纵子中,命名为hoU1;另一个编码功能未知蛋白的hoU基因同源物(serp0316)命名为phoU2.前期研究显示,敲除hoU1并不影响表皮葡萄球菌生长、生物膜形成等生物学特性,为此本研究对PhoU2进行了初步探讨.利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hoU2基因在表皮葡萄球菌SE1457不同生长时期的转录水平,发现其在细菌生长不同时间点持续表达,其中对数期(6 h)表达量相对较高.为进一步研究表皮葡萄球菌中PhoU2的表达情况,对PhoU2蛋白进行原核表达和纯化,并用纯化的重组PhoU2蛋白免疫小鼠制备PhoU2多克隆抗体.在此基础上,利用蛋白免疫印迹法检测PhoU2在SE1457菌株不同生长时间点的表达水平,结果显示PhoU2在细菌生长对数期和平台期均有表达.另外,在不同的表皮葡萄球菌临床分离株中均检测到PhoU2蛋白表达,表明PhoU2具有一定的保守性.以上研究提示,PhoU2可能作为PhoU的功能同源物发挥一定的作用,为进一步研究表皮葡萄球菌PhoU2的生物学功能及其在生物膜和持留菌形成中的作用奠定了基础.
錶皮葡萄毬菌可在植入性醫療材料錶麵形成生物膜,對多種抗生素耐受,而持留菌的形成是導緻細菌生物膜耐藥的原因之一.研究髮現,大腸埃希菌中PhoU可影響持留菌的形成,與細菌對多種抗生素及壓力條件的耐受相關,但錶皮葡萄毬菌中PhoU的功能仍不清楚.生物信息學分析顯示,在錶皮葡萄毬菌中存在2箇phoU同源基因,其中serp0956位于pst操縱子中,命名為hoU1;另一箇編碼功能未知蛋白的hoU基因同源物(serp0316)命名為phoU2.前期研究顯示,敲除hoU1併不影響錶皮葡萄毬菌生長、生物膜形成等生物學特性,為此本研究對PhoU2進行瞭初步探討.利用實時熒光定量反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測hoU2基因在錶皮葡萄毬菌SE1457不同生長時期的轉錄水平,髮現其在細菌生長不同時間點持續錶達,其中對數期(6 h)錶達量相對較高.為進一步研究錶皮葡萄毬菌中PhoU2的錶達情況,對PhoU2蛋白進行原覈錶達和純化,併用純化的重組PhoU2蛋白免疫小鼠製備PhoU2多剋隆抗體.在此基礎上,利用蛋白免疫印跡法檢測PhoU2在SE1457菌株不同生長時間點的錶達水平,結果顯示PhoU2在細菌生長對數期和平檯期均有錶達.另外,在不同的錶皮葡萄毬菌臨床分離株中均檢測到PhoU2蛋白錶達,錶明PhoU2具有一定的保守性.以上研究提示,PhoU2可能作為PhoU的功能同源物髮揮一定的作用,為進一步研究錶皮葡萄毬菌PhoU2的生物學功能及其在生物膜和持留菌形成中的作用奠定瞭基礎.
표피포도구균가재식입성의료재료표면형성생물막,대다충항생소내수,이지류균적형성시도치세균생물막내약적원인지일.연구발현,대장애희균중PhoU가영향지류균적형성,여세균대다충항생소급압력조건적내수상관,단표피포도구균중PhoU적공능잉불청초.생물신식학분석현시,재표피포도구균중존재2개phoU동원기인,기중serp0956위우pst조종자중,명명위hoU1;령일개편마공능미지단백적hoU기인동원물(serp0316)명명위phoU2.전기연구현시,고제hoU1병불영향표피포도구균생장、생물막형성등생물학특성,위차본연구대PhoU2진행료초보탐토.이용실시형광정량반전록-취합매련반응(RT-PCR)검측hoU2기인재표피포도구균SE1457불동생장시기적전록수평,발현기재세균생장불동시간점지속표체,기중대수기(6 h)표체량상대교고.위진일보연구표피포도구균중PhoU2적표체정황,대PhoU2단백진행원핵표체화순화,병용순화적중조PhoU2단백면역소서제비PhoU2다극륭항체.재차기출상,이용단백면역인적법검측PhoU2재SE1457균주불동생장시간점적표체수평,결과현시PhoU2재세균생장대수기화평태기균유표체.령외,재불동적표피포도구균림상분리주중균검측도PhoU2단백표체,표명PhoU2구유일정적보수성.이상연구제시,PhoU2가능작위PhoU적공능동원물발휘일정적작용,위진일보연구표피포도구균PhoU2적생물학공능급기재생물막화지류균형성중적작용전정료기출.
