西南农业学报
西南農業學報
서남농업학보
SOUTHWEST CHINA JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
4期
1772-1776
,共5页
曹丙蕾%张群%凌宗帅%邱洪凯%杨超然
曹丙蕾%張群%凌宗帥%邱洪凱%楊超然
조병뢰%장군%릉종수%구홍개%양초연
PRRSV%单克隆抗体%抗原位点%Western-blot%IFA
PRRSV%單剋隆抗體%抗原位點%Western-blot%IFA
PRRSV%단극륭항체%항원위점%Western-blot%IFA
PRRSV%Monoclonal antibody%Antigenic sites%Western-blot%IFA
采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(合6×His标签蛋白)的重组N蛋白.将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应.
採集某髮病豬場病料進行疑似PRRSV分離鑒定,經剋隆測序穫得一株美洲型的高緻病性PRRSV SD-TA株分離株,併對其N蛋白(覈衣殼蛋白)基因設計引物進行剋隆轉化,構建重組質粒pET-30a-ORF7,鑒定後經誘導錶達純化穫得大小約為21KD(閤6×His標籤蛋白)的重組N蛋白.將純化蛋白免疫BALB/c小鼠,經間接ELISA檢測後取脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行細胞融閤,併對融閤細胞上清進行抗體檢測,通過有限稀釋法,穫得瞭2株能穩定分泌抗N蛋白抗體的雜交瘤細胞株,命名為6D10和3H5,經鑒定後兩者均為IgG1型,且識彆于不同的抗原位點,經Western-blot和IFA檢測,單抗6D10和3H5均能與N蛋白髮生特異性反應,與無關蛋白無交扠反應,且均能與PRRSV經典株(VR株)和高緻病性變異株(SD-TA株)感染的Marc-145細胞產生特異性反應.
채집모발병저장병료진행의사PRRSV분리감정,경극륭측서획득일주미주형적고치병성PRRSV SD-TA주분리주,병대기N단백(핵의각단백)기인설계인물진행극륭전화,구건중조질립pET-30a-ORF7,감정후경유도표체순화획득대소약위21KD(합6×His표첨단백)적중조N단백.장순화단백면역BALB/c소서,경간접ELISA검측후취비세포여SP2/0골수류세포진행세포융합,병대융합세포상청진행항체검측,통과유한희석법,획득료2주능은정분비항N단백항체적잡교류세포주,명명위6D10화3H5,경감정후량자균위IgG1형,차식별우불동적항원위점,경Western-blot화IFA검측,단항6D10화3H5균능여N단백발생특이성반응,여무관단백무교차반응,차균능여PRRSV경전주(VR주)화고치병성변이주(SD-TA주)감염적Marc-145세포산생특이성반응.
