CAJ | 학술논문

为确定徐淮山羊Oct4(Octamer-binding transcription factor 4)基因启动子活性区域,并初步探讨TSA(Trichostatin A)和VPA(Valproic acid)对Oct4基因启动子活性的调控作用,文章采用Primer5.0设计包含Oct4基因启动子不同长度片段的特异性PCR引物,扩增并定向克隆至PGL3-Bacic荧光素酶报告载体,分别转染gEF、P19和COS7细胞,通过TSA和VPA诱导,进行双荧光报告基因活性检测.同时用Oct4启动子-1516～+30 bp片段替换pEGFP-N1中的CMV启动子,通过GFP荧光表达检测Oct4启动子的活性.结果表明:在gEF、P19和COS7细胞中Oct4启动子各片段均表现出不同程度的活性,且最强活性区域为上游-1516～+30 bp,基本活性区域为-238～+30 bp;在-1516～-946 bp、-615～-96 bp区域存在正调控元件,在-1936～-1516 bp、-946～-615 bp区域存在负调控元件;终浓度为1μtmol/L的TSA和4 mmol/L的VPA为诱导的最佳浓度,均能显著增强Oct4基因启动子的活性;-1516～+30 bp片段能够启动GFP的表达.研究结果为揭示Oct4基因的转录调控机制奠定了基础.
위학정서회산양Oct4(Octamer-binding transcription factor 4)기인계동자활성구역,병초보탐토TSA(Trichostatin A)화VPA(Valproic acid)대Oct4기인계동자활성적조공작용,문장채용Primer5.0설계포함Oct4기인계동자불동장도편단적특이성PCR인물,확증병정향극륭지PGL3-Bacic형광소매보고재체,분별전염gEF、P19화COS7세포,통과TSA화VPA유도,진행쌍형광보고기인활성검측.동시용Oct4계동자-1516～+30 bp편단체환pEGFP-N1중적CMV계동자,통과GFP형광표체검측Oct4계동자적활성.결과표명:재gEF、P19화COS7세포중Oct4계동자각편단균표현출불동정도적활성,차최강활성구역위상유-1516～+30 bp,기본활성구역위-238～+30 bp;재-1516～-946 bp、-615～-96 bp구역존재정조공원건,재-1936～-1516 bp、-946～-615 bp구역존재부조공원건;종농도위1μtmol/L적TSA화4 mmol/L적VPA위유도적최가농도,균능현저증강Oct4기인계동자적활성;-1516～+30 bp편단능구계동GFP적표체.연구결과위게시Oct4기인적전록조공궤제전정료기출.