棉花学报
棉花學報
면화학보
COTTON SCIENCE
2014年
3期
204-212
,共9页
郑云娜%代华琴%曹跃芬%李金娟%戎均康%丁明全
鄭雲娜%代華琴%曹躍芬%李金娟%戎均康%丁明全
정운나%대화금%조약분%리금연%융균강%정명전
棉花纤维%基因功能%酵母单杂交%SMART技术%cDNA文库
棉花纖維%基因功能%酵母單雜交%SMART技術%cDNA文庫
면화섬유%기인공능%효모단잡교%SMART기술%cDNA문고
Cotton fibers%gene function%yeast one-hybrid%SMART technology%cDNA library
为研究棉纤维起始发育的分子调控网络,以海岛棉(Gossypium barbadence L.)品种“海渝”开花当天(0 DPA)胚珠为实验材料,利用酵母单杂交技术来筛选棉纤维起始发育相关基因GbPDF2的上游调控转录因子.首先,克隆GbPDF2的启动子(Accession:KJ475468);构建了该启动子的诱饵融合载体(GbPDF2-PRO)-pAbAi,转入酵母细胞中重组为Y1HGold [Bait-pAbAi]菌株.之后,应用Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System系统构建酵母单杂交cDNA文库,转化重组酵母菌株,通过同源重组筛选GbPDF2的上游转录调节因子.构建的cDNA文库库容为2.23× 106,重组率为95.8％,插入片段大小为300 bp～2000 bp,其中大于1000 bp的阳性克隆为109个.cDNA插入片段经测序和Blast同源性分析,筛选出2个生长素响应因子,1个WRKY7转录因子,1个WD-repeat protein 40等与纤维发育相关的转录调节因子,为研究棉纤维起始发育的信号转导通路奠定了基础.
為研究棉纖維起始髮育的分子調控網絡,以海島棉(Gossypium barbadence L.)品種“海渝”開花噹天(0 DPA)胚珠為實驗材料,利用酵母單雜交技術來篩選棉纖維起始髮育相關基因GbPDF2的上遊調控轉錄因子.首先,剋隆GbPDF2的啟動子(Accession:KJ475468);構建瞭該啟動子的誘餌融閤載體(GbPDF2-PRO)-pAbAi,轉入酵母細胞中重組為Y1HGold [Bait-pAbAi]菌株.之後,應用Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System繫統構建酵母單雜交cDNA文庫,轉化重組酵母菌株,通過同源重組篩選GbPDF2的上遊轉錄調節因子.構建的cDNA文庫庫容為2.23× 106,重組率為95.8％,插入片段大小為300 bp～2000 bp,其中大于1000 bp的暘性剋隆為109箇.cDNA插入片段經測序和Blast同源性分析,篩選齣2箇生長素響應因子,1箇WRKY7轉錄因子,1箇WD-repeat protein 40等與纖維髮育相關的轉錄調節因子,為研究棉纖維起始髮育的信號轉導通路奠定瞭基礎.
위연구면섬유기시발육적분자조공망락,이해도면(Gossypium barbadence L.)품충“해투”개화당천(0 DPA)배주위실험재료,이용효모단잡교기술래사선면섬유기시발육상관기인GbPDF2적상유조공전록인자.수선,극륭GbPDF2적계동자(Accession:KJ475468);구건료해계동자적유이융합재체(GbPDF2-PRO)-pAbAi,전입효모세포중중조위Y1HGold [Bait-pAbAi]균주.지후,응용Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System계통구건효모단잡교cDNA문고,전화중조효모균주,통과동원중조사선GbPDF2적상유전록조절인자.구건적cDNA문고고용위2.23× 106,중조솔위95.8％,삽입편단대소위300 bp～2000 bp,기중대우1000 bp적양성극륭위109개.cDNA삽입편단경측서화Blast동원성분석,사선출2개생장소향응인자,1개WRKY7전록인자,1개WD-repeat protein 40등여섬유발육상관적전록조절인자,위연구면섬유기시발육적신호전도통로전정료기출.
