中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
6期
453-457
,共5页
施开创%官家明%胡杰%李凤梅%莫胜兰%陈汉忠%李军
施開創%官傢明%鬍傑%李鳳梅%莫勝蘭%陳漢忠%李軍
시개창%관가명%호걸%리봉매%막성란%진한충%리군
猪繁殖与呼吸综合征病毒%美洲型病毒株%TJM-F92疫苗株%多重TaqMan荧光定量RT-PCR%检测方法
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%美洲型病毒株%TJM-F92疫苗株%多重TaqMan熒光定量RT-PCR%檢測方法
저번식여호흡종합정병독%미주형병독주%TJM-F92역묘주%다중TaqMan형광정량RT-PCR%검측방법
porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)%North American genotype%TJM-F92 vaccine strain%multiplex TaqMan real-time RT-PCR%detection method
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、变异株及弱毒活疫苗TJM-F92株的基因序列差异,设计了2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分PRRSV美洲型经典株、变异株及TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法.结果显示,该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,与猪其他常见病毒无交叉反应;经典株、变异株、TJM-F92疫苗株重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL,比常规PCR敏感100倍;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5％.此外,该方法对324份疑似PPRSV感染的临床样品进行检测,结果显示PRRSV阳性114份,其中美洲型变异株105份、经典株6份、TJM-F92疫苗株3份,变异株和经典株混合感染4份.本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可以为PRRSV美洲型野毒株、疫苗株的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段.
為建立豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)的快速鑒彆檢測方法,本研究針對PRRSV美洲型經典株、變異株及弱毒活疫苗TJM-F92株的基因序列差異,設計瞭2對特異性引物和3條TaqMan探針,經過反應條件的優化,建立瞭能夠同時檢測併區分PRRSV美洲型經典株、變異株及TJM-F92疫苗株的多重TaqMan熒光定量RT-PCR方法.結果顯示,該方法具有特異性彊、敏感性高、重複性好的特點,與豬其他常見病毒無交扠反應;經典株、變異株、TJM-F92疫苗株重組質粒標準品的檢齣下限均為2.68拷貝/μL,比常規PCR敏感100倍;組內及組間重複試驗的變異繫數均小于1.5％.此外,該方法對324份疑似PPRSV感染的臨床樣品進行檢測,結果顯示PRRSV暘性114份,其中美洲型變異株105份、經典株6份、TJM-F92疫苗株3份,變異株和經典株混閤感染4份.本研究建立的多重TaqMan熒光定量RT-PCR方法可以為PRRSV美洲型野毒株、疫苗株的快速鑒彆檢測及流行病學調查提供有效的技術手段.
위건립저번식여호흡종합정병독(PRRSV)적쾌속감별검측방법,본연구침대PRRSV미주형경전주、변이주급약독활역묘TJM-F92주적기인서렬차이,설계료2대특이성인물화3조TaqMan탐침,경과반응조건적우화,건립료능구동시검측병구분PRRSV미주형경전주、변이주급TJM-F92역묘주적다중TaqMan형광정량RT-PCR방법.결과현시,해방법구유특이성강、민감성고、중복성호적특점,여저기타상견병독무교차반응;경전주、변이주、TJM-F92역묘주중조질립표준품적검출하한균위2.68고패/μL,비상규PCR민감100배;조내급조간중복시험적변이계수균소우1.5％.차외,해방법대324빈의사PPRSV감염적림상양품진행검측,결과현시PRRSV양성114빈,기중미주형변이주105빈、경전주6빈、TJM-F92역묘주3빈,변이주화경전주혼합감염4빈.본연구건립적다중TaqMan형광정량RT-PCR방법가이위PRRSV미주형야독주、역묘주적쾌속감별검측급류행병학조사제공유효적기술수단.
