中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
6期
448-452
,共5页
李超斯%周国辉%孙静%刘云%于力
李超斯%週國輝%孫靜%劉雲%于力
리초사%주국휘%손정%류운%우력
口蹄疫病毒%3B重组蛋白%MAb%ELISA
口蹄疫病毒%3B重組蛋白%MAb%ELISA
구제역병독%3B중조단백%MAb%ELISA
foot-and-mouth disease virus%recombinant 3B protein%monoclonal antibody%ELISA
为建立区分口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫和自然感染动物的血清学鉴别检测方法,本研究采用杆状病毒表达的FMDV非结构蛋白3ABC免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,并以原核表达的FMDV非结构蛋白3B作为抗原筛选融合细胞的培养上清液,获得一株稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞.经间接免疫荧光鉴定其为一株抗FMDV非结构蛋白3B的特异性MAb,为IgG1/κ亚类,间接ELISA检测杂交瘤细胞上清液和腹水的抗体效价分别为1∶12 800和1∶106.硫氰酸盐洗脱法测定其相对亲和力常数为1.5 mol/L.采用该MAb作为包被抗体并特异性的结合原核表达的3B重组蛋白用于检测血清中抗FMDV的非结构蛋白抗体,初步建立了以MAb为基础的ELISA方法.其MAb包被浓度为5μg/mL,3B重组蛋白浓度为1.1 μg/mL,被检血清1∶100稀释,通过检测猪血清并与3B间接ELISA和prioCHECK(R)NSP ELISA试剂盒进行比较,表明该方法具有更强的特异性.
為建立區分口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫和自然感染動物的血清學鑒彆檢測方法,本研究採用桿狀病毒錶達的FMDV非結構蛋白3ABC免疫BALB/c小鼠,取其脾細胞與SP2/0細胞融閤,併以原覈錶達的FMDV非結構蛋白3B作為抗原篩選融閤細胞的培養上清液,穫得一株穩定分泌抗3B蛋白單剋隆抗體(MAb)的雜交瘤細胞.經間接免疫熒光鑒定其為一株抗FMDV非結構蛋白3B的特異性MAb,為IgG1/κ亞類,間接ELISA檢測雜交瘤細胞上清液和腹水的抗體效價分彆為1∶12 800和1∶106.硫氰痠鹽洗脫法測定其相對親和力常數為1.5 mol/L.採用該MAb作為包被抗體併特異性的結閤原覈錶達的3B重組蛋白用于檢測血清中抗FMDV的非結構蛋白抗體,初步建立瞭以MAb為基礎的ELISA方法.其MAb包被濃度為5μg/mL,3B重組蛋白濃度為1.1 μg/mL,被檢血清1∶100稀釋,通過檢測豬血清併與3B間接ELISA和prioCHECK(R)NSP ELISA試劑盒進行比較,錶明該方法具有更彊的特異性.
위건립구분구제역병독(FMDV)역묘면역화자연감염동물적혈청학감별검측방법,본연구채용간상병독표체적FMDV비결구단백3ABC면역BALB/c소서,취기비세포여SP2/0세포융합,병이원핵표체적FMDV비결구단백3B작위항원사선융합세포적배양상청액,획득일주은정분비항3B단백단극륭항체(MAb)적잡교류세포.경간접면역형광감정기위일주항FMDV비결구단백3B적특이성MAb,위IgG1/κ아류,간접ELISA검측잡교류세포상청액화복수적항체효개분별위1∶12 800화1∶106.류청산염세탈법측정기상대친화력상수위1.5 mol/L.채용해MAb작위포피항체병특이성적결합원핵표체적3B중조단백용우검측혈청중항FMDV적비결구단백항체,초보건립료이MAb위기출적ELISA방법.기MAb포피농도위5μg/mL,3B중조단백농도위1.1 μg/mL,피검혈청1∶100희석,통과검측저혈청병여3B간접ELISA화prioCHECK(R)NSP ELISA시제합진행비교,표명해방법구유경강적특이성.
